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可溶性sCD80-Linker-sCD40L融合蛋白诱导非特异性抗肿瘤免疫
目的: 观察可溶性sCD80-Linker-sCD40L融合蛋白对体外非特异性抗肿瘤免疫的影响.方法: 以含sCD80-Linker-sCD40L、sCD80、sCD40L编码基因的重组腺病毒载体或对照病毒载体转染人卵巢癌细胞SKOV3,ELISA检测上清中可溶性sCD80-Linker-sCD40L融合蛋白及sCD80、sCD40L蛋白的表达.由卵巢癌患者外周血单个核细胞培养树突状细胞(dendritic cells, DCs),将DCs和自体T细胞共同培养并加入不同上清诱导48 h;用异基因混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR)检测诱导的DCs刺激淋巴细胞增殖能力;以诱导的T细胞为效应细胞,SKOV3细胞或K562细胞为非特异性靶细胞,通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogemse,LDH)释放实验检测杀伤活性.结果: ELISA检测证实病毒转染SKOV3细胞上清中sCD80-Linker-sCD40L融合蛋白、sCD80蛋白和sCD40L蛋白表达量分别为2.791 ng/ml、1.956 ng/ml和1.407 ng/ml.MLR证实,与对照相比,融合蛋白上清诱导的DCs[刺激-反应细胞比例1∶100,(0.382±0.053) vs (0.167±0.028),P《0.01;刺激-反应细胞比例1∶50,(0.636±0.164) vs (0.311±0.067), P《0.01;刺激-反应细胞比例1∶10,(1.245±0.271) vs (0.423±0.156),P《0.01]和sCD40L上清诱导的DCs[刺激-反应细胞比例1∶100,(0.341±0.062) vs (0.167±0.028),P《0.01;刺激-反应细胞比例1∶50,(0.567±0.106) vs (0.311±0.067), P《0.01;刺激-反应细胞比例1∶10,(1.098±0.263) vs (0.423±0.156),P《0.01]刺激同种异基因混合淋巴细胞增殖能力明显增强.LDH释放实验提示,sCD40L上清诱导的T淋巴细胞对靶细胞非特异性杀伤活性显著强于对照SKOV3组[(42.28±6.27) vs (22.49±3.56),P《0.01]和K562组(47.94±6.72)vs (26.33±2.89),P《0.01],而融合蛋白上清诱导的T淋巴细胞对靶细胞非特异性杀伤活性显著强于sCD40L上清诱导的T淋巴细胞[SKOV3组为(58.97±8.92)vs (42.28±6.27),P《0.05;K562组为(66.55±9.43)vs (47.94±6.72),P《0.05].结论: 可溶性sCD80-Linker-sCD40L融合蛋白能有效诱导体外非特异性抗肿瘤免疫,对肿瘤免疫治疗具有潜在应用价值.
