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EB病毒LMP1通过NF-κB介导的HSV-tk/GCV治疗EBV相关肿瘤的研究
目的:研究EB病毒潜伏膜蛋白1(EBV-LMP1)通过活化NF-κB反式激活HIV-LTR进而启动自杀基因HSV-tk在EBV相关肿瘤治疗中的作用,为进一步开展肿瘤治疗提供科学的实验依据.方法:以鼻咽癌细胞为实验模型,将HSV-tk基因置于HIV-LTR调控序列之下,构建LMP1调控且依赖于NF-κB的HSV-tk/GCV系统,采用同位素方法检测tk活性来研究LMP1通过NF-κB调控HSV-tk转录的靶向性和表达特征,MTF方法检测在GCV处理下肿瘤细胞的生长状况.结果:成功构建受LMP1调控且依赖于NF-κB的HSV-tk表达质粒,发现其在GCV处理下,表达LMP1的肿瘤细胞的生长有显著的抑制.结论:携带有LMP1-HSV-tk的细胞对GCV治疗高度敏感,显示这一肿瘤治疗系统在EBV相关肿瘤中具有一定的应用前景.
关键词： EBV-LMP1 NF-κB HSV-TK/GCV 肿瘤治疗 -
EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞中对细胞因子分泌的影响
目的 探讨EB病毒LMP1的分子致瘤机制,对LMP1是否促进IL1、IL2、IL3、IL4、IL6、IL8、IL10、TNF-α等细胞因子分泌进行研究.方法 鼻咽癌细胞系CNE2和HNE2以LMP1的表达和对照质粒处理,利用Western blotting方法从蛋白水平上确定LMP1的表达;利用细胞因子的ELASA试剂盒测定细胞上清中IL1、IL2、IL3、IL4、IL6、IL8、IL10、TNF-α的浓度.结果 鼻咽癌细胞在转染LMP1的表达质粒pcDNA3-LMP1后,细胞内的LMP1表达明显上调;在上调LMP1的细胞内,发现IL1、IL2、IL3、IL4的表达变化不明显(无统计学意义),在CNE2细胞中,转染组与转染对照组比较,IL6、IL8、IL10、TNF-α分别上调了6.7、4.6、3.6和3.4倍;在HNE2细胞中IL6、IL8、IL10、TNF-α分别上调了6.6、6.1、7.2和3.1倍(P＜0.05).结论 鼻咽癌细胞系中LMP1对IL1、IL2、IL3、IL4的表达影响不明显,但明显促进IL6、IL8、IL10、TNF-α等细胞因子的分泌.
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EBV-LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1细胞凋亡的影响
背景与目的:已证实EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latentmembraneprotein,LMP1)具有转化致瘤作用,在鼻咽癌的发生发展中起重要作用.LMP1的转化致瘤作用可能与细胞凋亡有关,本实验目的是观察EBV-LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1细胞凋亡的影响,探索LMP1在鼻咽癌发生发展中的可能机制.方法:用电转染的方法将带有绿色荧光蛋白GFP报道系统的EB病毒LMP1基因真核表达质粒导入CNE1,用荧光显微镜检测报道基因GFP的表达情况;用免疫组化法及Westernblot法检测目的基因LMP1的表达情况;用流式细胞仪、荧光染色及DNA片段分析等方法检测在有地塞米松磷酸钠或无血清饥饿诱导的情况下LMP1对CNE1细胞凋亡的影响.结果:CNE1G细胞(转染空载质粒PAT-GFP的CNE1细胞)及CNE1GL(转染目的基因质粒PAT-GFP-LMP1的CNE1细胞)有绿色荧光蛋白表达,CNE1细胞(未经转染的CNE1细胞)无绿色荧光蛋白表达;CNE1GL细胞LMP1呈阳性表达,而CNE1及CNE1G细胞均为阴性.CNE1、CNE1G及CNE1GL3组细胞分别用地塞米松磷酸钠或无血清1640培养液处理后均有凋亡出现,且两种诱导方法均能使CNE1GL组细胞的凋亡指数(apoptosisindex,AI)较CNE1及CNE1G组明显增高(P<0.05),而CNE1与CNE1G组的凋亡指数无明显差别.3组细胞常规培养下则无凋亡出现.结论:LMP1基因成功导入CNE1细胞并获得稳定表达.在CNE1细胞凋亡诱导过程中,LMP1对凋亡有明显的促进作用.
