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抗膀胱癌单抗Fab段基因的克隆及表达
目的:克隆抗膀胱癌单抗BDI的Fab段基因并在大肠杆菌中表达.方法:用逆转录-聚合酶链反应技术(RT PCR),从分泌抗人膀胱癌的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆K链和Fd段基因,克隆到Fab表达载体中,在大肠杆菌表达噬菌体抗体和可溶Fab;运用PCR介导的定位点突变改造VH氨基端序列;用ELISA、免疫组化法等进行特异性鉴定.结果:从分泌抗膀胱癌的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆了重链Fd段和κ链基因,在大肠杆菌中获得有抗原结合活性的噬菌体抗体和可溶性Fab的表达,但活性很弱,将VH氨基端序列矫正为亲本单抗原始序列后,明显改善了其活性,通过ELISA、免疫组化及模拟抗体库筛选证实了所获抗体片段的特异性结合及在抗体库技术中的可用性.结论:获得了功能性抗膀胱癌小分子抗体,并再次提示抗体氨基端序列对抗体活性的影响的重要性.
关键词： 抗膀胱癌单抗 免疫球蛋白可变区基因 FAB -
抗大肠癌噬菌体人单链抗体的初步鉴定及序列分析
目的:对抗大肠癌细胞的单克隆噬菌体单链抗体进行初步鉴定和测序分析.方法:采用细胞ELISA,免疫组化,DNA序列测定和计算机分析方法,对5个单克隆噬菌体抗体(CH273,CH205,CH209,CHA12,CH723)进行初步鉴定和序列分析.结果: 5个抗体均对人大肠癌细胞、人胚肾上皮细胞和其它某些人肿瘤细胞反应,也与人正常肝细胞有弱阳性反应,但不与鼠源性的癌细胞和正常细胞反应.细胞免疫组化进一步证实了ELISA结果的正确性.大肠癌免疫组化对大肠癌组织有特异性的结合反应,而不与正常大肠组织反应.测序结果为CH273 ScFv全长732bp;V,D,J分别属于VH3-30-D1-26-JH3-linker-V1-13-JL2,GenBank序号为AY028777和AY028996;CH205全长366bp, V,D,J分别VH1-46-D6-13-JH3, GenBank序号为AF359365;CH209,CHA12和CH723的ScFv基因完全相同,全长723bp,其VH-DH-JH与CH273 ScFv基因中的VH-DH-JH完全一致,V,D,J分别属于VH3-30-D1-26-JH3-linker-L2-Jκ2, GenBank序号为AF363774.结论:噬菌体抗体具有结合人大肠癌组织和细胞的活性,为进一步开发临床应用人源抗肿瘤抗体和小分子抗体片段奠定基础.
