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缺氧微环境对TSST-1诱导的抗CEA+结肠癌LoVo细胞免疫治疗的调控
目的:研究缺氧微环境对靶向性表达的超抗原中毒性休克综合征毒素-1(toxic shock syndrome toxin-1,TSST-1)激活人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)对CEA+结肠癌LoVo细胞杀伤作用的调控.方法:包装、收集前期构建的缺氧反应元件( hypoxia-response elements,HRE)和癌胚抗原启动子CEAp联合调控的逆转录病毒载体pLEGFP-N1-5HRE-CEAp-TSST-1-linker-CD80TM(简称pLEGFP-N1-5HCTC),感染CEA+ LoVo细胞及CEA -宫颈癌HeLa细胞,获取稳定表达跨膜型超抗原TSST-1-linker-CD80TM蛋白(TC融合蛋白)的肿瘤细胞.用缺氧模拟试剂CoCl2模拟缺氧微环境,RT-PCR和Western blotting分别检测缺氧调控下TSST-1的表达水平.将健康人PBL与pLEGFP-N1-5 HCTC感染后的肿瘤细胞共培养,3H-TdR掺入法检测缺氧调控下PBL的增殖能力,MTT法检测缺氧调控下PBL对肿瘤细胞的杀伤效应.结果:pLEGFP-N1-5HCTC病毒成功感染CEA+LoVo细胞(5HCTC/LoVo),RT-PCR和Westernblotting证实,缺氧可上调5HCTC/LoVo细胞中TSST-1mRNA和蛋白的表达,CEA - HeLa细胞在常氧和缺氧条件下均无TSST-1的表达.缺氧可上调5HCTC/LoVo细胞诱导的人PBL的增殖(7.3×103 vs 3.1×103cpm,P＜0.05),缺氧环境下PBL对5HCTC/LoVo细胞的杀伤率明显高于常氧环境(82.69％vs 53.50％,P＜0.01)；CEA - HeLa细胞不能刺激PBL增殖,PBL对其也无抑制作用.结论:缺氧微环境可显著上调靶向性表达的超抗原TSST-1诱导的对CEA+ LoVo细胞的杀伤作用.
