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JNK通路介导人肝癌耐药细胞株Bel-7402/FU多药耐药的调控机制
目的:探讨C-Jun氨基末端激酶(C-Jun N-terminal kinase,NK)信号转导通路对人肝癌5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)耐药细胞系Bel-7402/FU产生多药耐药(multidrug resistance,MDR)的调控作用,为肝癌细胞MDR机制的研究提供新靶点.方法:采用蛋白质印迹法检测人肝癌亲本细胞Bel-7402和耐药细胞Bel-7402/FU中JNK及磷酸化-JNK (phospho-JNK,p-JNK)的表达;在Bel-7402/FU细胞中,使用特异性阻断剂SP600125抑制JNK通路后,采用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测MDR1 mRNA和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达;FCM法检测罗丹明123 (rhodanmine 123,Rh123)在细胞内的积聚和外排情况;MTT法检测Bel-7402/FU细胞对5-FU的敏感性.结果:耐药细胞Bel-7402/FU组与亲本细胞Bel-7402组相比,TNK蛋白的表达无明显变化,而p-JNK蛋白的表达量明显增加;抑制JNK通路后,Bel-7402/FU细胞中MDR1 mRNA表达水平和P-gp蛋白的表达水平均明显下调,Rh123的蓄积明显增加,外排明显减少,且对5-FU的敏感性明显增加.结论:JNK信号转导通路参与人肝癌耐药细胞株Bel-7402/FU中多药耐药基因MDR1和多药耐药蛋白P-gp的表达,对其耐药起调控作用.
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基因芯片分析筛选BEL-7402与BEL-7402/FU细胞中的差异miRNA表达基因
目的:探讨2种肝癌细胞BEL-7402细胞及BEL-7402/FU细胞中差异表达的miRNA并对其基因表达谱进行生物学信息分析.方法:采用TRIzol一步法提取BEL-7402细胞及BEL-7402/FU细胞的总RNA,并纯化mRNA,反转录合成荧光分子Hy3标记的cDNA探针,与基因芯片杂交;采用Genepix Pro 6.0图像分析软件对芯片图像进行分析,把图像信号转化为数字信号,然后以差异为2倍的标准来确定差异表达基因.结果:在333个基因表达谱的筛选中,发现有2个基因表达水平显著上调,331个基因表达水平显著下调.结论:miR-122,miR-195等基因组对表达肝癌细胞耐药基因表达谱有显著的影响,可能参与肝癌耐药的发生、发展.
关键词： 基因芯片 差异表达 Bel-7402细胞 Bel-7402/FU细胞 miRNA
