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酶催化制备(R)-2-氯-1-[(R)-6-氟苯并二氢吡喃-2-基]-1-乙醇
采用基因重组大肠杆菌表达(R)-羰基还原酶,通过优化诱导温度、碳源类型和补料速度,初步确定佳产酶条件:诱导温度为28℃,碳源类型为葡萄糖,佳补料速度为20 ml/h,产酶活力提高至63.1 U/g.利用葡萄糖脱氢酶耦合(R)-羰基还原酶催化制备奈必洛尔关键中间体(R)-2-氯-1-[(R)-6-氟苯并二氢吡喃-2-基]-1-乙醇,确定葡萄糖脱氢酶和羰基还原酶的佳投酶量.当底物2-氯-1-[(R)-6-氟苯并二氢吡喃-2-基]-1-乙酮投料量为5 g时,葡萄糖脱氢酶和(R)-羰基还原酶的佳投酶量为1 000U和120U,所制备目标化合物纯度98.3％,收率91％,手性HPLC纯度为99.6％,手性GC纯度为98.5％.
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重组大肠杆菌BL21-pET28a(+)-ADH诱导表达羰基还原酶的条件优化与应用
目的:对重组大肠杆菌E.coli BL21-pET28a(+)-ADH表达羰基还原酶的条件进行优化,以增加目的蛋白的表达量,提高生物合成(S)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的转化率.方法:将重组质粒pET28a(+)-ADH转化E.coli BL21后,对诱导过程产生影响的4个因素,诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度及摇菌转数,利用SPSS统计学软件进行正交实验设计,并对实验结果进行直观分析及方差分析,对实验得出的佳搭配诱导条件进行验证.结果:直观分析中诱导温度的R值大,其次为摇菌转数和诱导剂IPTG浓度,诱导时间的R值小;方差分析表明诱导温度的P值小于0.05,而摇菌转数、IPTG浓度及时间因素的P值均大于0.05.利用优化后的菌种生物合成(S)-3,5-双三氟甲基苯乙醇,转化率达到95.16%.结论:本实验的优诱导条件为,诱导温度25℃、诱导摇菌转数200r·min-1、诱导剂IPTG浓度0.5mmol·L-1、诱导时间6h.且重组菌对于(S)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的转化率达到95.16%.
