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超低温冻存同种异体成骨细胞与异种脱钙骨复合异位组织工程化骨
目的:研究同种异体成骨细胞经超低温冻存后在体内的成骨能力及其免疫反应.方法:体外分离培养SD大鼠颅骨成骨细胞,提纯并传代至第3代时一部分作为对照组用;另一部分采用-196℃超低温冻存,24 h后复苏.将该两种第3代细胞分别与脱细胞并去抗原性的猪脱钙型松质骨(decalcified bone, DB)复合,将两种复合体和单纯DB分别植入SD大鼠背部肌袋内,各24只,4周后取标本,应用组织学、碱性磷酸酶测定、体视学及免疫学测定,观察成骨现象及免疫反应.结果 :经超低温冻存的同种异体成骨细胞异体异位植入后,成骨量、成熟度明显优于未冻存成骨细胞;引起的免疫反应亦低于未冻存细胞.结论:同种异体成骨细胞经超低温冻存、复苏后,抗原性明显降低,未引起强烈的免疫排斥反应,仍具有成骨能力.
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超低温冻存前后胎儿脐血中NK细胞活性的研究
目的探讨影响胎儿脐血NK细胞活性的因素.方法采用台盼蓝染色法检测NK细胞活性,脐血MNC用Ficoll分离液离心获得.[ HTH 结果经液氮(-196℃)冻存后脐血NK活性比冻存前显著提高.结论提示超低温能解除抑制脐血NK细胞活性的因素.
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超低温冻存对人骨髓基质干细胞生物学特性的影响
目的 观察超低温冻存对人骨髓基质干细胞(BMSC)生物学特性的影响. 方法 从正常献髓者髂骨采集骨髓,分离培养出BMSC,并对其进行成骨诱导培养.将第4代人BMSC经短期超低温冻存、复苏后,通过细胞活性率测定、形态学比较、细胞增殖功能、碱性磷酸酶(ALP)活性检测及体外矿化能力比较,观察超低温冻存对人BMSC生物学特性的影响.结果 第4代人BMSC冻存、复苏前后的两组细胞无论在细胞活性率、细胞形态、生长过程、ALP活性等方面均无显著性差异(P＞0.05).结论 短期的超低温冻存对人BMSC的生物活性无明显影响.
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超低温冻存对大鼠骨髓细胞膜完整性及功能的影响
目的:研究超低温冻存后的大鼠骨髓细胞的细胞膜表面形态和功能的完整性.方法:采用超低温保存技术对大鼠骨髓细胞进行慢速、快速冻存比较. 结果:以VS1作为快速冻存液,快速冻存骨髓细胞,不但快速简便,而且快速冻存较短时间的大鼠骨髓细胞的荧光强度以及膜表面形态与新鲜对照组及慢速冻存组相比差异无显著性.结论:快速冻存法冻存骨髓细胞是可行的,本研究为快速冻存骨髓细胞的实际应用提供了一定的科学依据.
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超低温冻存对人羊水间充质干细胞生物学特性的影响
目的 观察超低温冻存对人羊水间充质干细胞(AF-MSC)生物学特性的影响.方法 通过羊膜腔穿刺取得人孕16～23周羊水.分离培养出人AF-MSC.将第4代人AF-MSC经短期超低温冻存、复苏后,通过细胞活性率测定、形态学比较、细胞增殖功能测定、细胞周期分析及细胞表面抗原检测,观察超低温冻存对人AF-MSC生物学特性的影响.结果 第4代人AF-MSC冻存、复苏前后的两组细胞无论在细胞活性率、细胞形态、细胞增殖能力、细胞周期、细胞表面抗原的表达等方面均无显著性差异(P＞0.05).结论 短期的超低温冻存对人AF-MSC的生物活性无明显影响.
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人卵巢组织两种超低温冻存方法的研究
[目的] 探索两种人卵巢组织冷冻方案用于生殖细胞保存的效果.[方法] 活检卵巢组织来自15名经知情同意的手术患者.组织被随机分配到新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速冷冻组.观察和比较各组卵巢组织冻融后的原始卵泡形态完整率,并通过体外培养系统测定培养液中的雌二醇和孕酮水平,观察和比较冻融后卵巢组织内分泌功能.[结果] 本研究中新鲜组、慢速冻融组和玻璃化冻融组的原始卵泡形态完整率分别是97.6%、72.6%和80.3%.两冻融组与新鲜组相比明显下降(P＜0.001),而在两冻融组间差异并无统计学意义(P=0.237).在体外组织培养期间,两种冻融卵巢组织都能持续分泌雌二醇和孕酮,两组间差异无统计学意义(P＞0.05).[结论] 本研究中两种人类卵巢组织超低温冷存的方法是可行的,可适应不同需要.
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分离人肝细胞的超低温保存
目的 探索一种肝细胞超低温冻存的方法。方法 将分离的肝细胞洗涤(50×g,3 min)后，用自制配方的肝细胞保存液制成悬浮液，置于－80 ℃超低温冰箱内冻存，两周后取冻存的肝细胞常规方法复苏，台盼蓝染色、计数，普通方法接种培养观察，以同期分离的细胞接种培养为对照。结果 冻存的肝细胞解冻后存活率较高，经台盼蓝染色其活率为95%±1%，接种培养的细胞贴壁率为80%±2%，其白蛋白的合成功能与对照组的白蛋白合成功能差异无显著性，细胞生长良好。结论 人肝细胞可在－80 ℃超低温条件下保存，这可望成为贮存肝细胞的有效办法之一。
