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蛋白激酶C对内向整流钾离子通道的调节机制
内向整流钾离子(Kir)通道是在很多组织中广泛分布的一种钾离子通道,在维持钾离子平衡电位、调节细胞兴奋性和胰岛素分泌等方面发挥着重要的作用.Kir通道是众多调节因素作用的靶点,这些因素包括:K+、Mg2+、pH、ATP、G蛋白偶联受体(GPCR),磷脂酰肌醇4,5二磷酸(PIP2)、蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、花生四烯酸(AA)等.由于很多细胞外信号是通过PKC信号转导通路来调控Kir通道的,多年来为了更好地界定PKC在调控Kir通道功能中所扮演的角色及机制,人们进行了大量而深入的研究.本文对PKC调节Kir通道机制的研究进展及目前提出的一些新观点进行综述.
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动态观察不同的药理性阻断剂对膜磷脂PtdIns(4,5)P2的代谢过程的影响特征
目的时空观察PtdIns(4,5)P2在细胞内水解及再合成的动态变化过程,并比较渥曼青霉素(wortmannin)、氯化锂(LiCl)、U73122和新霉素四种阻断剂对PtdIns(4,5)P2代谢过程的影响.方法利用绿色荧光蛋白(GFP)与磷脂酶Cδ1 (PLCδ1)PH区(PLCδ1PH)的融合体(PLCδ1PH-GFP)作为标记PtdIns(4,5)P2的特异性荧光探针,使用激光扫描共聚焦显微镜技术动态观察及测量PtdIns(4,5)P2位置的变化.结果在CHO细胞,用ATP刺激内源性表达的P2Y受体,可引起PLCδ1PH-GFP荧光转位可恢复性的变化;渥曼青霉素和LiCl不影响PLC激活所介导的PLCδ1PH-GFP荧光由胞膜到胞浆的转位变化,但可阻断此转位的恢复;U73122可以阻断PLC激活所介导的PLCδ1PH-GFP荧光由胞膜到胞浆的转位变化; 新霉素对PLCδ1PH-GFP的转位无影响,但可抑制未表达PLCδ1PH-GFP的细胞中PLC激活后水解PtdIns(4,5)P2的作用.结论 PLCδ1PH-GFP可作为一种有价值的荧光探针来标记PtdIns(4,5)P2的动态变化;渥曼青霉素、LiCl、U73122和新霉素四种阻断剂对PtdIns(4,5)P2代谢过程有不同的影响;PLCδ1PH-GFP可阻断新霉素发挥其抑制PLC水解PtdIns(4,5)P2的作用.
关键词： 磷脂酰肌醇4 5二磷酸 绿色荧光蛋白 磷脂酶C PH区结构域 新霉素 受体 激光扫描共聚焦显微镜
