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白血病抑制因子通过乙酰化STAT3抑制肾间质纤维化的研究
目的 研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)对肾间质纤维化的作用及其机制.方法 TGF-β和(或)LIF和(或)TSA刺激肾脏成纤维细胞(NRK-49F);TGF-β和(或)LIF刺激Stat3基因敲除细胞(MEF-Stat3-KO);用KM小鼠建立单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型,腹腔内注射LIF后收集肾脏;用Western Blot方法检测纤维化相关性蛋白(Col3和FN1)和乙酰化Stat3的表达,用RT-PCR方法检测Col3和FN1的mRNA表达,用免疫组化方法检测肾脏组织的Col3、FN1和LIFR、Stat3的沉积.结果 在NRK-49F细胞中,LIF降低TGF-β诱导的Col3和FN1的表达;在Stat3-KO细胞中,LIF对Col3和FN1的表达无作用.UUO肾脏中,LIFR和Stat3的表达较假手术组明显减少,LIF注射后Col3和FN1的沉积减少.LIF刺激NRK-49F细胞15 min后,乙酰化Stat3明显增多;TSA刺激细胞后,Col3和FN1的表达降低更加明显.结论 LIF抑制体内外肾间质纤维化,依赖于Stat3,其机制可能包括乙酰化修饰.
关键词： 白血病抑制因子 肾间质纤维化 信号传导子及转录激活子3 大鼠 -
脉络丛上皮铁调素表达的年龄变化与IL-6/Stat3信号途径
老龄化可引起铁元素在脑内的蓄积.随着年龄的增加,脉络丛上皮可能是脑铁毒性、炎症反应和氧化应激损伤的重要结构.本文旨在研究铁代谢调节中的关键激素——铁调素在脉络丛上皮表达的年龄变化,及其与白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6)和信号转导子及转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,Stat3)的关系.本文以不同年龄段(3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33和36月龄)大鼠为研究对象,用实时定量RT-PCR和Western blot法检测铁调素及IL-6/Stat3信号途径相关蛋白在脉络丛上皮的表达变化.结果显示,3～18月龄年轻大鼠脉络丛上皮铁调素mRNA没有明显变化,21～36月龄大鼠的铁调素mRNA水平显著增加.脉络丛上皮IL-6和p-Stat3 mRNA和蛋白表达的年龄变化趋势与铁调素mRNA一致.以上结果提示,随着年龄的增加,炎症因子IL-6可能作用于相应的受体,通过Stat3信号转导途径,参与调节铁调素在脉络丛上皮的表达变化.
关键词： 老化 脉络丛 铁调素 白细胞介素-6 信号传导子及转录激活子3 -
靶向大鼠血管平滑肌细胞STAT3的慢病毒干扰载体的构建及鉴定
目的 构建并鉴定靶向大鼠血管平滑肌细胞信号传导子及转录激活子3(STAT3)基因的慢病毒干扰载体.方法 针对STAT3基因的不同部位设计4对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段,克隆到慢病毒干扰载体PLKO.1中,构建shRNA慢病毒干扰载体PLKO.1-STAT3-shRNA-1、2、3、4,并感染大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞.Western blot法检测并筛选佳抑制效率的shRNA干扰载体.结果 Western blot法证实PLKO.1-STAT3-shRNA-1、2、3、4均能抑制细胞内STAT3基因的表达,以PLKO.1-STAT3-S1为明显.用PLKO.1-STAT3-S1转染血管平滑肌细胞后可以促进细胞凋亡.结论 成功构建了靶向STAT3基因的shRNA慢病毒干扰载体.
关键词： 血管平滑肌细胞 慢病毒 信号传导子及转录激活子3
