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Label free方法研究大鼠脑脊液中锰毒性相关的差异蛋白质组
目的 本研究旨在探查临床可介入性生物样本脑脊液中锰毒性相关的差异表达蛋白谱,为今后深入的毒性机制研究和病程相关生物标志研究提供科学数据.方法 运用非标记( label free)定量蛋白质组学技术分析比较成年大鼠经腹腔注射暴露于氯化锰(以锰计,6 mg Mn/kg BW)1个月(亚急性)、3个月(亚慢性)及3个月加30 d恢复期后与其相应对照组(腹腔注射生理盐水)大鼠的脑脊液中蛋白质的差异表达情况,并根据蛋白质的基因本体( gene ontology,GO)注释对所鉴定蛋白进行了分类分析.结果 本研究共鉴定到173个蛋白质,经差异性比较与重复蛋白剔除后获得123个锰毒性相关的差异表达蛋白,其中,染锰后55个蛋白质表达量上调,68个蛋白质表达量下调.根据差异性,123个差异表达蛋白可分为4个层次,分别为表达升高(4个),表达下降(2个),仅在对照组鉴定到(66个),仅在染毒组鉴定到(51个).对123个差异蛋白按其GO注释分别进行细胞组件、分子功能及生物学过程分类后发现,差异表达蛋白主要来自于细胞核、细胞外基质及细胞质,以结合功能为主,少数参与代谢、应对刺激等生物学过程,半数以上的生物学过程未知.结论 由于脑脊液中的蛋白质多数都是由脉络丛组织合成分泌的,因此上述脑脊液中差异表达的蛋白质组不仅可以作为锰神经毒性作用引起的神经退行性疾病的潜在的生物学标志,而且还为锰致脉络丛(血-脑脊液屏障的组织基础)上皮细胞毒性损伤作用分子机制的深入研究提供线索和实验基础.
关键词： 锰 脑脊液 脉络丛 非标记(label free)定量蛋白质组学技术 GO分析 -
脉络丛对铅的屏障作用及其病理形态学观察
目的观察脉络丛对铅的屏障作用及其病理形态学改变.方法给3个实验组兔子每公斤体重分别腹腔注射含5、25或50 mg的Pb的醋酸铅溶液,对照组注射生理盐水.注射后4和24 h处死动物,采集脑脊液、大脑皮质、侧脑室脉络丛、血液、肝脏和肾皮质样品.经浓硝酸和过氧化氢湿式消化后,用原子吸收分光光度计测定组织样品中铅浓度.脉络丛样品经冲洗、固定后,制成组织切片,用光镜、电镜观察脉络丛的病理形态学改变.结果组织铅浓度从高到低依次为肝、肾皮质、侧脑室脉络丛、血液、大脑皮质和脑脊液.脑脊液中铅浓度低;3个剂量组的脉络丛铅浓度都明显地高于大脑皮质和脑脊液铅浓度.光镜见脉络丛上皮细胞肿胀,颗粒变性,严重的呈坏死性改变.电镜见脉络丛上皮细胞溶酶体增加,线粒体肿胀.结论侧脑室脉络丛对铅有屏障作用,能阻止铅从血液进入脑脊液和脑组织.但当染铅达到一定剂量时,脉络丛本身也发生一定的病理形态学改变.
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大鼠脉络丛组织中锰毒性差异蛋白的筛选、鉴定和GO分析
目的 应用光镜、透射电镜及差异蛋白质组学技术探讨锰对构成血-脑脊液屏障的脑脉络从组织(choroidplexus,CP)的病理损伤作用及其差异表达蛋白,并对这些差异蛋白按其gene ontology(GO)注释进行细胞学组分、分子功能与生物学过程的分类分析.方法 采用雄性SD大鼠(1.5月龄)进行腹腔注射无水氯化锰(6 mg Mn/kg B·W)建立3个病程(30、90 d及90 d后无处理观察30 d)的锰中毒动物模型,分离其双侧侧脑室CP后,应用光镜与透射电镜观察锰所引起的CP病理形态学改变,同时应用蛋白质组学技术筛检出锰毒性相关的差异表达蛋白.结果 病理形态学观察发现锰可引起CP上皮细胞发生不规则萎缩变小,微绒毛结构紊乱、缩短,胞浆内出现空泡,核质凝聚,线粒体结构破坏,细胞之间的紧密连接出现部分断裂或消失等,并且这些改变随病程发展表现为加重的趋势;2D-PAGE结合nano-LC-MS/MS的办法鉴定到了32个锰病程相关的差异蛋白质,其中有27个上调蛋白,5个下调蛋白.GO分类分析后发现差异表达蛋白主要分布存线粒体、膜表面以及细胞质内,以结合、催化活性以及转运功能为主,参与代谢与转运等生物学过程.结论 锰可引起CP的细胞及亚细胞结构发生病理性损伤并表现为一定的时效性,即便停止锰染毒上述损伤仍然进行性加重;同时,还可造成CP中特定功能蛋白质随病程进展发生上调或下调的变化,这些改变很可能是锰引起BCB结构损伤和功能失调的分子基础,其功能蛋白质组学的研究值得进一步深入开展.
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脑脉络丛组织中锰毒性差异表达蛋白的体外验证
目的 本实验室前期研究在锰染毒体内实验模型的大鼠脑脉络丛组织中鉴定到32个锰毒性相关的差异蛋白.本试验挑选出其中7个差异表达蛋白,包括抑制素蛋白(PHB1)电压阴离子通道(VDAC)、肌动蛋白β亚型(β-Actin)、应激性磷蛋白1(STI1)、热休克蛋白70(HSP70)、转甲状腺素蛋白(TTR)和中间丝波形蛋白(Vimentin),在大鼠永生化脉络丛上皮Z310细胞体外染锰模型中,对其蛋白和mRNA水平的变化趋势进行验证.方法 氯化锰(0、50、100和200 μmol/1)染毒Z310细胞24 h,采用蛋白印迹法(Western Blot)测定7个锰毒性相关蛋白的蛋白表达水平；同样剂量的氯化锰染毒Z310细胞12 h,以实时定量逆转录聚合酶链式反应法(Real time-RT PCR)测定7个蛋白在mRNA水平的表达情况.结果 随着剂量的增加PHBI、β-Actin和STIP1在蛋白表达与mRNA水平均表现为上调的效应趋势,VDAC、HSP70、TTR和Vimentin在蛋白表达与mRNA水平均表现为下调的效应趋势；PHB1、β-actin、STIP1和TTR在Z310细胞中的表达效应趋势与体内动物模型脑脉络丛中锰毒性差异蛋白的变化趋势相符,而VDAC、HSP70和Vimentin在Z310细胞中的表达效应趋势则与之相反.结论 氯化锰对PHB1、B-actin、STIP1和TTR的毒性效应在体内和体外是一致的,染锰后其蛋白表达和mRNA水平的变化趋势是可靠准确的.这为开展锰致脑脉络丛组织及其上皮细胞的毒性效应及其分子机制研究提供了有价值的线索.
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脉络丛对镉的屏护作用及其病理形态学改变
为研究脉络丛对镉的屏护作用及其病理形态学改变,给兔耳缘静脉注射CdCl2 1.0,2.0 和4.0 mg/kg,4、24h处死兔,采集组织样品,分别测定血液、脑脊液、侧脑室脉络丛、大脑皮质、肝脏和肾皮质镉含量;脉络丛样品冲洗、固定后,制成组织切片,用光镜、电镜观察脉络丛的病理形态学改变.结果显示脉络丛镉明显高于血液、脑脊液、大脑皮质,高剂量组脑脊液镉含量明显高于其它组.光镜可见脉络丛上皮细胞变性、坏死,电镜可见脉络丛上皮鲁米那平面破损,纤毛缺失,核变性,胞质空泡,溶酶体增加,粗面内质网肿胀,细胞连接间隙变宽.提示脉络丛能浓缩和屏护镉,阻止镉从血液进入脑组织.当染镉达到一定剂量时,这种屏护作用减弱甚至消失,侧脑室脉络丛也发生一定的病理形态学改变.
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儿童脉络丛乳头状癌的影像诊断
目的:分析儿童脉络丛乳头状癌的影像特征,总结诊断经验.方法:2011年1月—2017年1月,医院共收治儿童脉络丛肿瘤患者84例,术中病理诊断为脉络丛乳头状癌1例,良性脉络丛乳头状瘤47例.结果:该例脉络丛乳头状癌被误诊,当时拟诊断为高级别脑胶质瘤.CT平扫表现为侧脑室轻微高密度结节影,密度均匀,病灶内出现点状、团块状高密度钙化影,脉络丛乳头状瘤患者中有6例对象伴有脑积水,3例伴有钙化.脉络丛乳头状癌患者M R I检查T1W I上呈稍低信号,T2W I高信号,可见钙化,并伴有血管流空影,肿瘤信号欠均匀,可有坏死、周围水肿.结论:儿童脉络丛乳头状癌极易被误漏诊,需要关注那些不典型、伴恶性影像学表现特征的肿瘤.
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活血利水法治疗淋巴细胞脉络丛脑膜炎1例
患者,女,17岁,学生.2001年10月18日傍晚觉头痛,发热恶寒,鼻塞流涕.当天夜晚发热达39.3℃,头痛欲裂,周身酸痛,呕吐3次,遂到某医院诊治.当时查体:瞳孔等大,两眼底有渗出,项强,布氏颈征(+).实验室检查:血白细胞6.5×109/L,淋巴0.62.脑脊液外观正常,压力稍高,细胞数1.2×106/L,其中淋巴细胞占89%;蛋白质0.55g/L,糖3.2mmol/L,氯化物125mmol/L.诊断为淋巴细胞脉络丛脑膜炎.给予病毒唑、地塞米松和20%的甘露醇静脉滴注治疗.
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大鼠侧脑室脉络丛的超微结构特征
脑和脊髓终生浸浴于一种液体,即脑脊液中.脉络丛位于第Ⅲ、Ⅳ及侧脑室内,一般认为是脑脊液产生的主要场所,也是血-脑脊液屏障的部位所在.有关脉络丛超微结构的研究,国外已有一些报道[1,2],但国内尚少见.本文利用扫描和透射电子显微镜观察法,对大鼠侧脑室脉络丛的超微结构进行了深入的研究,以期为进一步探讨其功能提供足够的超微形态学依据.
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APPSWE Tg2576小鼠脑屏障结构
目的 探讨小鼠的血脑屏障(BBB)及血脑脊液屏障(BCSFB)的基本结构及其在阿尔茨海默病(AD)发生、发展过程中结构、功能及及其超微结构的改变.方法 实验用动物采用APPSWE Tg2576鼠,分为APPSWE转基因阳性鼠(模型组)和同窝生野生型小鼠(对照组),每组各20只.饲养16个月后进行全身灌流固定,开颅切取侧脑室室壁及其脉络丛组织.采用免疫荧光及透射电子显微镜技术观察BBB及BCSFB的超微结构,从而观察AD模型脑屏障的改变.结果 AD模型组与对照组相比较,血管密度明显降低;AD小鼠脑屏障正常结构受到损害,主要是脑血管内皮细胞(或脉络丛内皮细胞)之间的连接及其细胞器受损,脉络丛超微结构也出现明显变化,主要表现为细胞间隙增宽,细胞之间的黏附连接等连接结构也有部分碰坏,胞质内出现较多的囊泡状结构等.结论 和正常鼠相比,AD鼠脑屏障受到一定的损害,可能致使脑屏障的转运机制出现相应的改变并影响脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)的清除,脑屏障中存在的稳态机制,如其分泌物和受体介导的信号传导也可能出现改变,这些因素可能共同参与了AD的形成和进展.
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乙肝病毒感染者外周血IL-21表达及意义
在慢性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV)小鼠模型的研究中发现,病毒特异性CD8+T淋巴细胞(cytotoxic T cell,CTL)功能的发挥需要特异性CD4 +T细胞的辅助.IL-21主要由活化的CD4+T细胞分泌,对维持病毒特异性的CTL功能具有重要的作用.本研究在体外观察不同乙肝病毒( HBV)感染状态下,血浆中IL-21的表达及产生IL-21的HBV特异性CD4+T淋巴细胞频数,探讨IL-21在HBV感染中的意义.
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脑脊液实验诊断在中枢神经系统疾病中的应用
脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)是由侧脑室脉络丛产生,经第3脑室、第4脑室进入小脑延髓池分布于脊髓蛛网膜下腔内,是一种无色透明的液体.它可以保护脑和延髓免受外力震荡损伤,可调节颅内压力的变化,并参与脑组织的物质代谢以及供给脑、脊髓营养物质和排除代谢废物.
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三维超声计算机辅助虚拟脏器分析技术检测胎儿脉络丛、侧脑室体积及其临床价值
目的 测量不同孕龄胎儿脉络丛、侧脑室体积并建立其正常值,评估脉络丛与侧脑室体积比的临床意义.方法 前瞻性选择275例孕14～40周正常胎儿和26例孕17～38周轻、中度侧脑室扩张胎儿作为研究对象.采用三维超声计算机辅助虚拟脏器分析(virtual organ computer-aided analysis,VOCAL)技术测量胎儿脉络丛和侧脑室体积,并计算脉络丛与侧脑室两者体积的比值.结果 (1)胎儿脉络丛、侧脑室体积与孕周的回归方程分别为ycp=-5.760+0.617x-0.011x2和ylv=10.719+1.133x-0.020x2.(2)正常胎儿侧脑室体积与脉络丛体积之间存在直线相关关系,Pearson相关系数为0.945.正常胎儿脉络丛与侧脑室体积比为(0.57±0.09),其与孕周的直线回归方程为y=-0.003x+0.64.(3)轻、中度侧脑室扩张胎儿的脉络丛与侧脑室体积比值在正常范围内的其预后比较好,反之预后较差.结论 三维超声VOCAL技术可用于检测胎儿脉络丛与侧脑室体积.脉络丛与侧脑室体积比可作为评估轻、中度侧脑室扩张胎儿预后的指标之一.
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胎儿Galen静脉血管瘤超声表现1例
孕妇,20岁.孕1产0,孕39+4周.临产前常规超声检查:胎儿双顶径9.6 cm,头围33.1 cm,头颅形态规则,脑中线居中,侧脑室内脉络丛显示,但无扩张;在丘脑平面见一呈"蝌蚪形"的头为2.5 cm×2.0 cm类圆形,体尾为1.2 cm×4.6 cm的管状无回声,境界清,管壁薄;彩色多普勒显示该无回声区为血流信号(图1),频谱表现为高速低阻Vp:1.24 m/s,Vm:0.86m/s,RI:0.30.胎儿脊柱排列整齐;胸腔内见增大的心脏,以右房、右室增大为主,心脏在矢状位占胸腔的4/5,胎心规律,心率137次/min,房间隔中部缺损约5 mm,在收缩期呈瘤样膨胀(图2).心包及胸腔内未见无回声区.腹围34.7 cm,腹壁光整、连续,腹腔内未见异常声像及无回声区.
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B超诊断胎儿脑积水并双侧马蹄内翻足1例
孕妇,32岁.孕23周.常规产前超声检查.超声显示:双顶径6.2 cm,股骨长径3.6 cm,脊柱排列整齐,胎心搏动规律,胎盘位于左侧壁;胎儿脑室扩张,内径约1.4 cm,可见悬浮脉络丛,双侧足底、胫腓骨分别可在同一切面显示.超声诊断:单胎存活,胎儿畸形(脑积水、双侧马蹄内翻足,见图1).后经引产、尸检证实.
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超声诊断胎儿脉络丛囊肿1例
孕妇,24岁.妊娠26周,孕1产0,无家族遗传病史,爱人体健,无烟酒嗜好.查体:T 36.5℃、BP 12/8kPa,心肺(-),宫底高度脐上3指,胎心140次/分.B超所见:宫内见一胎儿,头位,颅骨光环完整,双顶径6.7 cm,脑中线不偏移,侧脑室无扩张,于双侧脑实质脉络丛处探及一囊性回声区,大小分别为1.2cm×1.1cm,1.4cm×1.1cm,壁薄,光滑,边界清晰,内透声好,后方有增强效应(图1);胎心搏动规律,心率144次/分,脊柱排列整齐,胎儿腹部及四肢均正常,胎盘位于子宫前壁,大羊水深度5.9cm,超声诊断:1.单胎中妊;2.胎儿颅内囊肿.
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彩超诊断胎儿颅内脉络丛囊肿并动态观察消失1例
孕妇,30岁.妊娠20周产前检查.子宫增大与孕周相符.胎头位于下腹部,双顶径约为5.4cm,颅骨光环完整,脑中线居中,双侧脑室未见扩大.颅内左侧脑室外侧见直径约为1.08cm近圆形液性暗区,境界清,内壁较光滑,整齐,内为无回声区且透声好,后方回声轻度增强,CDFI未探及血流(图1).脊柱光带排列规则,胎心规则,未见胎儿胸腹水,四肢、躯干未见明显畸形.胎盘位于子宫前壁,大羊水前后径为4.6cm.超声提示:单胎中期妊娠,头位;胎儿颅内小囊肿(考虑来源于脉络丛可能大).10天后复查,颅内小囊肿缩小,直径为0.731cm(图2).再经半月后复查,颅内小囊肿进一步缩小,直径为0.527cm(彩图14,见Ⅱ页).第四次复查,颅内小囊肿消失.
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单发脉络丛脂肪瘤1例
患者女,76岁.头痛5天,右眼肿4天.心肺腹查体未见异常.神经系统:神志尚清,定向力、记忆力均正常.颅神经正常,双下肢肌力正常.头颅MR:平扫双侧基底节区及额叶脑白质内见多发片状长T1,长T2信号,FLAIR像为高信号,病变边界清楚.右侧脑室后角脉络丛内见小圆形短T1,长T2信号影,约0.6 cm×0.6 cm,信号均匀,边界清晰(图1A、B).T1和T2抑脂序列病变均示病变信号明显减低(图1C、D).MR诊断:双侧基底节区及额叶多发腔隙性脑梗死,右侧脑室脉络丛脂肪瘤.
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对比分析幕上与幕下脉络丛乳头状瘤
目的 对比分析幕上与幕下脉络从乳头状瘤在患者一般资料及脑积水方面的差异.方法 回顾性分析40例经病理证实的脉络丛乳头状瘤患者的影像学资料,根据肿瘤发生部位分为幕上组(19例)和幕下组(21例),记录患者一般资料,统计伴发脑积水的例数,并进一步观察治疗后脑积水的缓解情况.结果 幕上、幕下组的男女比例分别为15∶4和10∶11,差异有统计学意义(P＜0.05)；幕上、幕下组的平均年龄分别为(7.2±2.2)岁和(39.4±3.2)岁,差异有统计学意义(P＜0.05);幕上、幕下组伴脑积水的例数分别为14例和5例,差异有统计学意义(P＜0.05).术后7天复查,幕上组4例脑积水缓解(4/14),幕下组4例脑积水缓解(4/5).结论 幕上与幕下脉络丛乳头状瘤在患者性别、年龄分布和伴发脑积水方面均存在明显差别.幕上脉络丛乳头状瘤更易伴发脑积水,且多为交通性脑积水,术后不易缓解;幕下脑积水多为梗阻性脑积水,术后易缓解.
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盖伦大脑大静脉动脉瘤样畸形MRI诊断(附2例报告)
本文2例盖伦(Galen)大脑大静脉动脉瘤样畸形,报告如下.例1,女,33岁,剧烈头疼1天,无神经系统阳性体征.CT平扫:大脑大静脉池区可见明显增粗、扭曲的高密度影,并累及左侧脑室脉络丛,第三脑室和侧脑室略扩大.
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产前超声检查胎儿脉络丛囊肿与染色体异常的关系
目的 探讨胎儿脉络丛囊肿与染色体异常的相关性.方法 回顾性分析在我院确诊的58例脉络丛囊肿胎儿的超声表现及相关临床资料.结果 58例脉络丛囊肿胎儿中,双侧20例,占34.48%;单侧38例,占65.52%.囊肿直径3.0～18.4 mm.胎儿仅有脉络丛囊肿(孤立性脉络丛囊肿)48例随访至出生后6个月未发现异常;胎儿除脉络丛囊肿外还伴有其他结构异常(复杂性脉络丛囊肿)10例,其中9例行染色体核型分析,3例为18三体,6例染色体核型正常.结论 胎儿孤立性脉络丛囊肿与染色体异常无明显相关性,若合并其他结构异常,染色体异常的风险则明显增高,此时应行染色体核型分析.
