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山羊β-酪蛋白的分离和抗体的制备
目的纯化山羊奶中的β-酪蛋白,并制备多克隆抗体.方法用DEAE阴离子交换层析分离羊奶中的β-酪蛋白,将其免疫新西兰兔,免疫印迹分析分离的兔血清.结果测序结果验证了分离产物为山羊β-酪蛋白,ELISA检测表明获得了高效价的抗血清,免疫印迹分析表明,制备的抗血清可与羊奶中的β-酪蛋白发生特异的免疫反应.结论获得了兔抗山羊β-酪蛋白的特异性多克隆抗体.
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木瓜蛋白酶水解对β-酪蛋白膜的润湿性和构象的影响
目的:评价木瓜蛋白酶水解对牛β-酪蛋白(β-CN)膜的润湿性和构象的影响.方法:将β-CN通过自组装固定于芯片表面,采用消散因子石英晶体微天平(quartz crystal microbalance with dissipation,QCM-D)测量β-CN膜频率(△F)变化.β-CN膜水解前后的润湿性和构象变化分别通过接触角测量仪和掠角红外光谱(GA-FTIR spectra)仪测量.结果:水解后β-CN膜接触角变小,伴随酶的浓度从0.5～12.5 mg/L增加,β-CN膜由疏水性向亲水性转变.FTIR测量表明β-CN膜水解后的构象发生了改变.除α-螺旋结构外,β-CN膜含有的二级结构(％)均变小,表明水解反应首先发生与β-CN分子的疏水性C端.疏水性反应和氢键结合是水解反应的主要驱动力.结论:木瓜蛋白酶水解β-酪蛋白β-CN膜导致了润湿性和构象的改变,其生物学意义有待于进一步研究.
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木瓜蛋白酶水解对β-酪蛋白膜的形态和黏弹性的影响
目的:评价木瓜蛋白酶水解对牛β-酪蛋白(β-CN)膜表面形态和黏弹性的影响.方法:将β-CN通过自组装固定于芯片表面,采用消散因子石英晶体微天平(quartz crystal microbalance with dissipation,QCM- D)测量β-CN膜能量消散因子(△D)和频率(△F)和黏弹性变化.β-CN膜水解前后的表面形态变化通过原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)表征.结果:伴随着酶浓度提高,残余的β-CN膜的黏弹性增加(P＜0.05).AFM图像显示水解后残余的β-CN膜的厚度和粗糙度均降低.结论:木瓜蛋白酶水解β-酪蛋白β-CN膜的反应具有浓度依赖性特征；水解反应使膜变得较薄而光滑,且更加紧凑和较硬.
关键词： 木瓜蛋白酶 β-酪蛋白 水解 消散因子石英晶体微天平 原子力显微镜 -
木瓜蛋白酶水解β-酪蛋白膜的动力学研究
目的:采用消散因子石英晶体微天平(QCM-D)原位、实时和动态监测木瓜蛋白酶水解β—酪蛋白生物膜的动力学过程,比较不同浓度酶的水解效率.方法:用β-酪蛋白在QCM-D上建立体外蛋白膜模型,采用不同浓度的木瓜蛋白酶水解膜,观察频率和厚度的改变,运用Boltzmann方程对实验数据进行拟合,单因素方差分析和SNK-q检验比较水解参数B、Δh、V50和C.结果:随着酶浓度增大,膜的厚度Δh减薄,ΔF上升增多,水解参数B增大,C减小,V50缩短(P＜0.05).结论:在一定浓度范围内水解蛋白生物膜时,酶的水解效率随浓度增大而提高.
关键词： 消散因子石英微天平 木瓜蛋白酶 β-酪蛋白 Boltzmann方程
