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微电场通过活化黏着斑激酶信号通路促进缺氧条件下绒毛外滋养细胞的迁移/侵袭
目的 探讨微电场刺激及缺氧条件对黏着斑激酶(FAK)信号通路的作用及对人胎盘绒毛外滋养细胞系HTR-8/SVneo迁移/侵袭的影响.方法 划痕实验分析绒毛外滋养细胞在缺氧条件下的迁移情况;western blot检测微电场刺激后绒毛外滋养细胞FAK Tyr397和pY576/577位点及其下游柱蛋白(paxillin)分子磷酸化水平,并检测微电场刺激5、10 h后HTR-8/SVneo细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平;2、5、10 μ mol/L FAK抑制剂PF-573228处理HTR-8/SVneo细胞后观察细胞行为,并用western blot检测其MMP-2的表达水平.结果 微电场刺激能改善缺氧条件下HTR-8/SVneo细胞的迁移速度;与对照组比较,缺氧条件下微电场刺激可促使FAK Tyr397位点磷酸化水平及paxillin分子表达水平明显升高(P均＜0.05),而pY576/577位点则无明显改变;经微电场刺激5、10 h后,HTR-8/SVneo细胞MMP-2表达水平均升高(P均＜0.05);经FAK抑制剂处理后,HTR-8/SVneo细胞对微电场的应答反应明显受抑制,其MMP-2表达水平降低.结论 微电场可能通过活化FAK信号通路促进缺氧培养绒毛外滋养细胞的迁移/侵袭.
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微电场通过非整合素途径活化粘着斑激酶促进滋养细胞迁移/侵袭研究
目的 探讨生理性微电场促进体外培养的人胎盘滋养细胞迁移/侵袭功能是否与滋养细胞表面整合素(integrin)表达有关.方法 用150 mV/mm的直流微电场刺激滋养细胞,时间分别为5、10和15 h,测定其迁移情况并观察细胞形态变化.Western blot检测刺激前后1h内粘着斑激酶FAK活化情况和细胞表面integrinα1、integrinα5、integrinαy和integrinα1蛋白表达水平.结果 在含有10％胎牛血清的培养基中,150 mV/mm电场刺激下滋养细胞向负极定向迁移,迁移速度和距离较对照组明显增加(P=0.021),胞体拉长,垂直于电场方向排列;胞内FAKTyr397位点于刺激后5、10、30、60 min内迅速活化并逐渐加强(P＜0.05);刺激前后滋养细胞表面integrinα1、integrinα5、integrinαV、和integrinα1蛋白表达水平无明显改变(P＞0.05).结论 生理性直流微电场可能通过非整合素途径活化FAK从而促进滋养细胞迁移/侵袭功能,但其详细机制仍需进一步研究.
