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日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48单特异性双链抗体的构建表达与初步鉴定
目的构建和表达日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48单特异性双链抗体,并初步鉴定表达产物活性.方法应用SOE法扩增双链抗体基因VH-linker-VL(Diabody,简称D).将D重组入原核表达载体pBAD/gⅢ.表达质粒转化E.coli TOP10,左旋阿拉伯糖诱导表达.对D的表达产物进行分离纯化,采用Dot-ELISA法检测纯化蛋白与NP30、可溶性虫卵抗原(SEA)、可溶性成虫抗原(SWAP)的结合活性.结果测序证实双链抗体基因D构建成功;构建了D的原核表达系统,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约为27 kD;经纯化、变性复性后用Dot-ELISA法鉴定结果表明,D表达的纯化蛋白可与NP30特异性结合.结论所构建、表达的NP48单特异性双链抗体具有亲本单抗的部分特性.
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日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP48可变区基因的克隆及序列分析
目的克隆日本血吸虫单克隆anti-anti-id NP48轻链及重链可变区基因并分析其序列.方法从杂交瘤细胞NP48提取总RNA、RT-PCR扩增目的基因片段,分别克隆于pMD18-T载体,测序并作核苷酸序列分析.结果 VL基因全长336 bp,属鼠免疫球蛋白κ链第Ⅱ亚类,由种系基因he24与Jκ4重排而来.该VL 基因序列已被GeneBank收录(accession No.AY309010).VH基因全长354 bp,属鼠免疫球蛋白重链第Ⅱ亚类, 由种系J558.47、Dsp2.2和JH4基因重排而来.该VH基因序列已被GeneBank收录(accession No.AY312433).结论序列比对分析表明该VL、VH基因为日本血吸虫单克隆anti-anti-id NP48可变区基因.
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鼻咽癌抗独特型抗体诱导的体液和细胞免疫应答
目的探讨抗独特型抗体(Ab2)2H4和5D3模拟抗原诱导免疫应答的能力.方法用Ab2免疫Balb/c小鼠获得抗血清,以ELISA检测其Ab3,WesternBlot分析其识别抗原的分子质量.用迟发型超敏反应(DTH)和淋巴细胞增殖试验,检测Ab2诱发细胞免疫反应的能力.结果 2H4,5D3免疫同系动物产生的含有抗抗独特型抗体(Ab3)的抗血清,可特异性地与靶细胞结合.FC2(Ab1)和经2H4免疫的Ab3可识别相对分子质量(Mr)相同约68000的抗原,且不同于HNL5(Ab1)和5D3免疫的Ab3所识别的抗原(Mr80000).在DTH试验中,所致小鼠足垫肿大的程度,2H4和5D3实验组均显著高于对照组.而在淋巴细胞增殖试验中,Ab2免疫鼠脾T细胞在体外对靶细胞或Ab2的再次刺激呈现明显的细胞增殖反应,而无关肿瘤细胞或抗体的刺激则不能引起细胞增殖.结论抗独特型抗体2H4和5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像,能模拟不同分子质量的鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫应答.
