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蛛网膜下腔注射Ro25-6981对切口痛大鼠的镇痛作用研究
目的 研究蛛网膜下腔注射Ro 25-6981,一种新型选择性的N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚基拮抗剂,对切口痛大鼠的镇痛作用.方法 雄性SD大鼠60只,将大鼠采用随机数字表法分为4组,每组15只:对照组(C组)、切口痛组(Ⅰ组)、鞘内注射Ro 25-6981 50μg/25μl组(R1组)、鞘内注射Ro 25-6981 200μg/25μl组(R2组),每组15只.C组和Ⅰ组均鞘内注射5%DMSO溶剂25 μl.Ⅰ组、R1组和R2组在鞘内注射后行右后足切口痛模型制备.所有动物接受鞘内注射和手术均在吸入七氟醚麻醉下进行.术前24 h、术后2、6、24h检测大鼠痛行为学指标,包括50%机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL),同时测定鞘内给药前后大鼠的运动功能.结果 与C组和术前基础值比较,Ⅰ组术后各时间点50%PWMT(7.0±0.9)、(6.7±0.7)、(6.4±1.2)g和PWTL(10.3±1.4)、(10.1±1.0)、(10.0±1.0)s均降低(P＜0.05);与Ⅰ组比较,R1组各时间点50%PWMT和PWTL差异无统计学意义(P＞0.05);R2组术后2 h 50%PWMT(9.0±0.8)g和PWTL(13.7±1.0)s与Ⅰ组相比均升高(P＜0.05),6、24 h痛行为学差异无统计学意义;鞘内给药前后大鼠运动功能差异无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射选择性的Np2B拮抗剂Ro 25-6981 200.0μg可以对切口痛大鼠产生明显的镇痛作用而不影响运动功能.
关键词： Ro 25-6981 NMDA受体NR2B亚基 切口痛 鞘内注射 -
急性阿片耐受大鼠脊髓NMDA受体NR2A及NR2B亚基表达的改变
目的:了解大鼠短期多次应用芬太尼能否发生急性阿片耐受以及急性阿片耐受大鼠脊髓NMDA受体NR2A和NR2B亚基表达的改变.方法:24只体重为200～220 g的雄性SD大鼠随机分为3组(n=8):对照组(C),生理盐水组(S)及芬太尼组(F).F组大鼠给予皮下注射芬太尼30μg/kg,共4次,每两次注射之间间隔15 min,S组大鼠以生理盐水代替芬太尼,C组大鼠未给药.给药前及给药结束后每30 min以Von-Frey仪测定各组大鼠的机械刺激缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT).当F组大鼠的PWT恢复到给药前基础水平时,各组大鼠均给予腹腔注射吗啡5 mg/kg.随后仍每30 min测定各组大鼠的PWT,直至F组大鼠的PWT再次回到基础水平.对各组大鼠不同时间点的PWT进行组内和组问比较.另24只体重为2000～220 g的雄性SD大鼠分组及给药方法同前(分为C~*、S~*及F~*组),当F~*组大鼠的PWT首次恢复到基础值时,不给予吗啡,处死各组大鼠,取脊髓,以Western blotting方法测定NMDA受体NR2A及NR2B亚基的蛋白表达水平.结果:连续4次皮下注射芬太尼(F组)后大鼠首先表现为PWT较基础值显著升高,随后PWT降低到基础值以下,然后逐渐恢复至基础值水平,此时皮下注射吗啡后,吗啡的镇痛效果显著低于其他两组大鼠(S组,C组).F~*组大鼠脊髓的NR2B亚基表达水平显著高于C~*组及S~*组,各组大鼠脊髓的NR2A亚基表达水平的差异无统计学意义.结论:短期应用芬太尼可导致大鼠发生急性阿片耐受.急性阿片耐受大鼠的脊髓NMDA受体NR2B亚基表达水平显著升高,NR2A亚基表达水平无明显变化.
关键词： 急性阿片耐受 芬太尼 吗啡 NMDA受体NR2A亚基 NMDA受体NR2B亚基 -
鞘内注射Ro25-6981对大鼠慢性吗啡耐受的抑制作用研究
目的 研究鞘内注射Ro25-6981对大鼠吗啡耐受的抑制作用及其可能机理.方法 SD大鼠40只,随机分成四组,每组10只.空白对照组(C1组):蛛网膜下腔注射0.9%生理盐水25 μl;溶剂组(C2组):蛛网膜下腔注射5%二甲基亚矾(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)溶剂25 μl;鞘内注射组Ⅰ(R1组):蛛网膜下腔注射Ro25-6981注射液 25 μl(50 μg);鞘内注射组Ⅱ(R2组):蛛网膜下腔注射Ro25-6981注射液 25 μl(100 μg).四组大鼠完成鞘内注射后,参照文献[3]方法分别建立慢性吗啡耐受模型.注射后第1天、第3天、第5天和第7天采用热水甩尾法(hot-water tail-flick)测定甩尾潜伏期(Tail Flick Latency,TFL)的变化来评价吗啡的镇痛效果,同时采用斜板实验方法进行运动功能检测.结果 同C1组比较:R1组第3 天和第5天MPE%差异有统计学意义(p＜0.05),R2组各时间点MPE%的差异有统计学差异(p＜0.05),C1和C2组差异无统计学意义.与第1天比较:R1组第5天和第7天MPE%逐渐降低(p＜0.05),第3天变化不明显;R2组第7天MPE%明显降低(p＜0.05),第3天和第5天变化不明显(p＞0.05).不同时间点各组大鼠斜板角度的变化差异无统计学意义(p＞0.05).结论 Ro25-6981鞘内注射能够在一定程度上抑制大鼠慢性吗啡耐受的形成且不影响运动功能,表明NR2B在吗啡耐受形成中起了关键的作用.
关键词： Ro25-6981 NMDA受体NR2B亚基 吗啡耐受 鞘内注射 -
小鼠NMDA受体NR2B亚基短发夹RNA干扰真核表达载体的构建与鉴定
目的 设计并构建小鼠N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)短发卡RNA干扰真核表达载体并鉴定.方法 根据NMDA受体NR2B mRNA编码序列设计并合成针对NR2B的特异性RNA干涉片段.将其克隆入pYr-1.1质粒载体,构建NR2B短发夹RNA(shRNA)真核表达载体pYr-1.1-GRIN2B-shRNA,并对其进行酶切和测序鉴定.结果 酶切和测序结果均证明NMDA受体NR2B shRNA已经插入质粒载体pYr-1.1.结论 NMDA受体NR2B shRNA 真核表达载体pYr-1.1-GRIN2B-shRNA构建成功.
关键词： 小鼠 RNA干扰 NMDA受体NR2B亚基 shRNA干扰载体 -
甲基苯丙胺与HIV-Tat蛋白协同致大鼠纹状体NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达
目的 观察甲基苯丙胺(MA)与HIV-Tat蛋白协同作用致大鼠相关脑区N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚基和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达变化,探讨MA与HIV-Tat协同作用对神经系统的影响.方法 50只健康雄性SD大鼠随机分为实验组:MA组(10 mg/kg MA,每日2次腹腔注射,连续4d)、HIV-Tat组(10μg HIV-Tat注入大鼠脑纹状体)和MA +HIV-Tat组(按MA组注射MA4d后按HIV-Tat组注入HIV-Tat);对照组:生理盐水腹腔注射或纹状体内注射.各组大鼠分别于注射结束后48 h和7d处死,麻醉后用多聚甲醛灌注,取出脑组织并固定,石蜡包埋,作冠状切面,用免疫组化和蛋白免疫印迹法对中毒大鼠纹状体中NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达进行观察,并进行图像分析,测量其平均光密度值,与对照组比较并进行统计学分析.结果 各实验组与对照组比较,纹状体内NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达均有不同程度增高,差异具有统计学意义(P＜0.05);其中MA+HIV-Tat组与MA组、HIV-Tat组比较,NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达显著增高(P＜0.05).结论 MA与HIV-Tat蛋白的共同作用能够显著增加NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达,揭示NMDA受体NR2B亚基和iNOS参与了MA与HIV-Tat蛋白的协同神经毒性机制.
