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Harobin文献资料
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海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin的原核表达及其活性测定
本文利用原核系统表达海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin,并纯化和鉴定其活性.首先PCR法从模板分别扩增SUMO以及Harobin基因,再重叠PCR方法获得SUMO-Harobin融合基因,经NdeI、BamHI双酶切后,连入pET3C质粒,构建pET3 C-SUMO/Harobin重组质粒.重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导菌体表达,收集菌体分析发现大部分目的蛋白为包涵体.将获得的包涵体经尿素变性,用Ni-NTA亲和层析后,梯度透析复性融合蛋白.复性好的蛋白用Benzamidin Sepharose亲和层析纯化,得到高纯度的融合蛋白.进一步采用降解纤维蛋白原法测定融合蛋白活性.结果成功构建了pET3C-SUMO/Harobin重组载体,融合蛋白Harobin在原核系统中是以包涵体的形式存在.融合蛋白经过变性复性,并结合两步纯化法获得了90％纯度的融合蛋白；经过测定纤维蛋白原降解能力,显示融合蛋白具有降解纤维蛋白原的活性.
