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重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体纯化中试工艺研究
目的摸索一条适合重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的中试分离纯化工艺.方法发酵后菌体经洗涤、超声破碎和2步盐析等预处理后,经过3步色谱纯化,对终蛋白质进行纯度、内毒素和活性检测.结果目的蛋白质纯度达98%以上,生物活性为4.8×107～6.94×107U/mg,热原符合标准.终1L发酵液经过分离纯化,可以得到目的蛋白质200mg以上.结论此工艺纯化收率高,蛋白质纯度高,生物活性好,重复性好,适合工业化生产.
关键词： 重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 分离 纯化 -
芹菜素增强TRAIL诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡
目的:研究芹菜素(API)与重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)合用对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞.碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析sub-G1百分率.DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带.结果:API(20μmol/L/和TRAIL(20ng/mL)以及两者合用作用48h的人宫颈癌HeLa细胞sub-G1百分率分别是3.56%±0.20%、6.69%±0.40%和59.8%±4.20%;DNA琼脂糖凝胶电泳显示:20μmol/LAPI与20ng/mL的TRAIL联合处理,展示出典型DNA梯形条带图谱.结论:芹菜素具有增强TRAIL诱导HeLa细胞凋亡作用.
关键词： 宫颈癌 芹菜素 重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡 -
芹菜素通过组成性激活JNK敏化TRAIL诱导HeLa细胞凋亡
目的 研究芹菜素(API)与重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)合用对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制是否涉及组成性激活JNK.方法 体外培养人宫颈癌HeLa细胞.碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析亚二倍体细胞(sub-G1)百分率.比色法测定细胞Caspase-3活性.DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带.Western Bloting检测细胞蛋白的表达.结果 API(20μmol/L)和TRAIL (20ng/mL)以及两者合用作用48 h的人宫颈癌HeLa细胞系sub-G1百分率分别是(3.56±0.20)%、(6.69±0.40)%和(59.87±420)%；HeLa细胞Caspase-3的活性分别是培养基对照组的1.4、1.5和39倍.DNA琼脂糖凝胶电泳显示:20μmol/LAPI与20 ng/mL的TRAIL联合处理,展示出典型DNA梯形条带图谱,Caspase-3抑制剂zDEVD -fmk能够消除API和TRAIL合用促细胞凋亡作用.API以浓度依耐方式增高HeLa细胞JNK蛋白磷酸化水平.JYK特异性抑制剂SP600125能阻断API激活JNK,并抑制API增强TRAIL促细胞凋亡作用.结论 芹菜素敏化TRAIL诱导细胞凋亡作用与其组成性激活JYK有关.
关键词： 宫颈癌 芹菜素 重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡 JNK
