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伤寒沙门菌fljA样基因缺陷变异株的制备
目的: 为探讨z66鞭毛抗原阳性伤寒沙门菌的fljA样基因的功能,制备沙门菌 fljA样基因缺陷变异株.方法: 根据伤寒沙门菌fljA样基因序列,设计PCR特异性引物并在5'-末端加接酶BglII位点,扩增fljA样基因上、下游片段,用BglII消化后,定向连接成fljA样基因的缺损性同源性核苷酸片段,先克隆至pGEM-T质粒,再经BamHI酶切后导入自杀质粒pGMB151,电转化入伤寒沙门菌(GIFU 10007),进行同源重组.用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为fljA样基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定.结果: PCR及序列分析证实,缺陷变异株的fljA样基因缺失231个碱基.结论: 成功构建伤寒沙门菌fljA样基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌鞭毛抗原表达的调控作用奠定了基础.
