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免疫组化染色的操作技巧和注意事项
目的：本院对免疫组化染色过程中存在的问题及对策进行深入的探讨以及仔细的分析。方法自从2010年6月~2011年7月期间，本院共收治免疫组化染色标本患者有200例，对其中存在问题的60例患者标本进行了仔细的分析，并且要提出科学的应对措施。结果本院对疫组化染色过程提出了主要的积极应对措施和科学的建议。结论对于每一个步骤以及环节，都会影响到染色的终后果，对此，要尽量避免在染色过程中会出现一些问题，会使免疫组化染色的质量有所提高。
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抗原修复方法的合理选择
免疫组化技术是临床病理诊断工作中不可缺少的辅助技术.随着各种免疫组化试剂与操作技术的不断丰富与发展,免疫组化技术逐渐走进每一个病理科.而抗原修复也是免疫组化操作过程中的一个极其重要的环节,由于修复方法的多样性和相关技术资料过于抽象,使得抗原修复更加神秘化.因而,如何合理选择抗原修复方法也就见仁见智了.
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免疫组织化学和免疫荧光染色在肾活检组织石蜡切片磷脂酶A2受体检测中的应用
目的 评估免疫组织化学和免疫荧光染色方法在肾活检组织石蜡切片磷脂酶A2受体(PLA2R)检测中的应用情况,寻找在肾组织中检测PLA2R准确、快捷的实验方法.方法 对193例肾活检组织石蜡切片进行PLA2R免疫组织化学染色,抗原修复方法为高压锅热修复加胰蛋白酶双修复法,其中包括特发性膜性肾病(IMN) 139例、膜型狼疮性肾炎15例、乙型肝炎病毒相关性膜性肾病8例、IgA肾病18例和微小病变13例.将其中22例肾组织PLA2R阳性IMN患者的肾组织石蜡切片分别给予高压锅热修复、高压锅热修复加胰蛋白酶双修复、水浴热修复和水浴热修复加胰蛋白酶双修复等4种抗原修复法,然后行PLA2R免疫组织化学染色,对染色效果进行比较.再将其中15例肾组织PLA2R阳性IMN患者的肾组织石蜡切片分别给予水浴热修复加胰蛋白酶双修复、蛋白酶K修复、胃蛋白酶修复等3种抗原修复法,然后行PLA2R免疫荧光染色,对染色效果进行比较.结果 193例标本中,IMN患者PLA2R免疫组织化学染色结果阳性率为90.6％ (126/139);其他54例非IMN患者均为阴性.采用高压锅热修复加胰蛋白酶双修复法和水浴热修复加胰蛋白酶双修复时,22例患者的PLA2R免疫组织化学染色结果均为阳性;而采用高压锅热修复法或水浴热修复时,仅部分患者为阳性.采用水浴热修复加胰蛋白酶双修复、蛋白酶K修复和胃蛋白酶修复时,15例患者的PLA2R免疫荧光染色结果均为阳性,但水浴热修复加胰蛋白酶双修复为弥漫球性着色,荧光强度2+～3+,而蛋白酶K修复和胃蛋白酶修复为局灶节段性着色,荧光强度3+ ～4+.结论 肾组织PLA2R免疫组织化学染色可有效鉴别IMN与继发性MN.行免疫组织化学染色和免疫荧光染色时,首选水浴热修复加胰蛋白酶双修复法.
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全自动免疫组化染色仪与人工操作的比较
目的:探讨Autostainer全自动免疫组化染色仪在免疫组化中的应用.方法:选用常用的AAT、CerBb-2、CK、HBcAg、ER、PR、Ki-67等30多种一抗,使用统一的二抗,每种待测一抗用2种方法进行免疫组化染色,对比2种方法的实验情况.结果:使用全自动免疫组化染色仪染色背景干净,无边缘效应,着色均匀,阳性定位准确,均优于人工操作.结论:使用全自动免疫组化染色仪进行免疫组化染色不仅自动化程度高,省时省力,而且重复好,标准化程度高,提供更准确、更科学的实验结果.
关键词： 全自动免疫组化染色仪 人工操作 免疫组化 抗原修复 -
煮沸法在石蜡切片抗原修复中应用的探讨
目前组织学与病理学切片由常规采用的10％福尔马林固定，石蜡包埋组织制成。此种切片的苏木精—伊红染色(HE染色)提供了清晰的，可供诊断的组织、细胞图像。随着免疫组织化学技术的出现和逐渐推广，发现这种切片的组织中许多抗原物质被掩盖，影响对该病变一些抗原表达的观察。为此，人们相继采取各种酶、微波和高压处理等方法修复抗原，均使各种抗原得到不同程度的修复，抗原表达的阳性率提高。但上述诸方法也显示出各自不同的缺点，例如：易脱片、操作复杂或是费用较高等。
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牙髓NGF染色中抗原修复的探讨
在免疫组织化学染色中,抗原修复的好坏直接影响免疫组织化学染色的结果.为了提高在牙髓NGF免疫组织化学染色中的抗原性,使阳性部位显色更加明显,我们对牙髓组织中的抗原修复,采用酶消化和热煮沸法进行比较,以探讨佳的抗原修复方法.
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抗原修复预处理对层黏连蛋白免疫组织化学的影响
免疫组织化学技术已成为病理诊断和各个研究领域中不可缺少的技术手段之一.常规甲醛固定、石蜡包埋组织后引起许多抗原决定簇封闭,导致免疫组化染色呈假阴性或表达微弱的结果.
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胃癌中CD34微血管计数抗原修复条件的选择
目的:比较三种抗原修复法在胃癌CD34微血管计数(microvessel count,MVC)中的染色效果.方法:热修复法、酶消化法和酶消化加热修复法在30例胃癌组织中进行CD34微血管计数的免疫组化染色.结果:该三种方法在30例胃癌组织中进行的CD34微血管计数值,分别为40.5±12.1、394±7.2、563±8.5.其中,热修复法和酶消化法之间无显著性差异,两种方法与酶消化加热修复法比较均有显著性差异.结论:酶消化加热修复法在三种方法中效果优于其他两组.
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抗原修复技术在免疫组化中的应用
免疫组织化学是免疫学与分子生物学和病理形态学相结合的一门学科,已成为现代生物医学的一项重要方法学,其操作简单、特异性强、敏感性高.在病理诊断和科研中已被大家广泛采用,能提供抗原特异性表达和准确定位,促进了临床病理诊断的提高[1].但目前所进行的常规石蜡切片标本均用甲醛固定,使抗原性物质或由于形成醛、羧甲键等原因而被封闭了部分抗原决定簇,或由于蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽,从而影响免疫组织化学结果,为解决这些问题需要做抗原修复.常用抗原修复技术有酶消化法、加热法、高温高压加热法等,本文就抗原修复技术的原理、方法和应用进展综述如下.
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肝癌石蜡标本免疫组化染色常见问题及对策
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)约占原发性肝癌的90%，在全球范围发病率居恶性肿瘤第5位，死亡率居第3位，在我国仅次于肺癌和胃癌[1]。免疫组织化学技术是HCC临床病理诊断中重要的技术手段之一，且广泛应用于HCC科学研究领域。然而，由于HCC标本病理学形态多样化、病变组织质地较硬及富含内源性生物素等因素，导致在实验操作中特异性染色不佳，假阳性及假阴性等现象频发，大大影响了临床诊断与科研检测。本实验室在实践中发现，选择正确合理的抗原修复方法以及排除非特异染色是极其重要的环节。
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不同抗原修复方法对免疫组化试验结果的影响
免疫组织化学技术是用已知抗体或抗原检测组织细胞中的未知抗原或抗体的技术,能将形态、代谢和功能密切结合起来,具有操作简单、敏感性高、特异性强等优点,已广泛用于病理诊断.
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病理切片组织抗原修复免疫组化研究
随着科技的发展,免疫组化技术对病理诊断的作用越来越为大家共识,单克隆和多克隆抗体的问世,无疑对诊断病理工作者是一个极大的鼓舞.但遗憾的是大多数抗体只适用于新鲜组织或冰冻切片,而不能用于常规的10%中性福尔马林固定、石蜡包埋组织.因为福尔马林固定后许多抗原决定簇被封闭,以至无法与抗体结合.
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论述免疫组织化学染色中抗原修复方式及对比分析
目的:探讨分子生物化学实验室内免疫组织化学染色中抗原修复的佳方式.方法:采用高温高压修复法和微波修复法对病理科采用的四项免疫组织化学标记(ER、PR、C-erbB-2及E-Cadherin)进行染色对比以获取佳抗原修复方法,在显微镜下评判其统计阳性率及阳性程度对两种方法进行比较.结果:ER、PR、C-erbB-2及E-Cadherin四项标记在高温高压抗原修复法与微波抗原修复法均具有较高的阳性率,在阳性程度、显色强度及背景清晰度方面高温高压抗原修复法要优于微波抗原修复法.结论:高温高压抗原修复法与微波抗原修复法均是简便实用的方法,两者相比高温高压抗原修复法具有更强适用性.
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抗原修复液pH值和抗体浓度对免疫组织化学技术检测PD-L2染色结果的影响
目的:探讨不同浓度抗体和不同pH值的抗原修复液对免疫组织化学反应结果的影响,以提高免疫组织化学染色阳性率.方法:采用3种不同抗体浓度作预处理后,分别在pH值6.0和pH值9.0条件下,进行免疫组织化学SP法检测PD-L2分子在食管磷状细胞癌组织中的免疫组织化学染色效果.结果:PD-L2抗体稀释浓度1∶400的免疫组化染色效果优于抗体浓度1∶800;pH值9.0的抗原修复液处理后的免疫组化染色效果优于pH值6.0的抗原修复.结论:PD-L2抗体稀释浓度1∶400,pH值9.0抗原修复液处理后的免疫组化染色效果佳,既可提高免疫组织化学反应阳性表达率,又能提高制片质量,是理想的检测PD-L2分子免疫组织化学反应的优化方案.
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高pH值修复液提高雌激素受体、孕激素受体检测阳性率探讨
目的 探讨如何提高检测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的阳性结果. 方法 利用高pH值的抗原修复液对组织进行微波修复,使抗原决定簇暴露. 结果 经过对ER、PR抗原修复液的改进,使ER、PR阳性信号增强,阳性率提高.结论 通过对传统的修复液进行适当的改进,对修复时间和温度的调整,使ER、PR阳性信号增强,阳性率提高.
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高压锅水浴法修复组织抗原和微波染色并用的体会
目前,免疫组织化学染色技术的出现,是病理学发展史上的一次革命.免疫组织化学特异性高、简便易行,无论在临床病理诊断,还是病理研究领域,都起着十分重要的、不可缺少的作用.但日常工作中所使用的10%甲醛固定的石蜡包埋组织常产生蛋白交联反应,遮蔽了组织内某些蛋白抗原,使抗体不能与抗原结合,导致免疫组织化学染色呈假阴性结果,影响了病理诊断的结果及科研的结论.用于免疫组织化学的抗体近千种,不同抗体对病理切片的抗原修复要求也不尽相同.
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免疫组织化学技术标准化的体会
随着分子医学的发展，单克隆抗体的临床应用，免疫组织化学技术作为独立而重要的病理学检测指标，指导着病理诊断和临床个体治疗，它看似简单，却是较复杂的综合多步骤实验技术，由于处于较快发展阶段，抗体和检测系统不断更新，因此免疫组织化学每一步骤的一点点偏差，对于检测结果都可能是失败的，在这里我们讨论的标准化应用与体会，也只是相对的标准化或步骤的优化，现将我们的标准化操作和质量控制做到极致，包括我科从标本接受、制片、抗原修复、对照设立以及免疫组织化学操作各步骤的标准化、染色结果判读标准化，供病理界同仁商榷共同建立实验规范模式。
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EDTA抗原修复液在不同修复方法中的效果比较
目的 探讨EDTA抗原修复液在不同修复方法中的修复效果.方法 对EDTA抗原修复液采用不同修复时间的高压法对同一组织进行抗原修复,检测10种常用抗体的染色效果并与煮沸法进行比较.结果 EDTA抗原修复液高压法在不同修复时间修复效果存在差异.结论 使用EDTA抗原修复液高压法及选择合适的修复时间修复抗原能够达到理想的修复效果,可以代替煮沸法.
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不同抗原修复方法在陈旧性石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化中的比较
目的 探讨不同抗原修复方法在陈旧性石蜡切片乳腺珠蛋白免疫组化中的效果.方法 选取2010年1月至2012年4月本实验室保存的陈旧组织石蜡切片样品76例,所有样品组织均取自乳腺癌患者,各取连续3张切片分别归入试验组、高压组和微波组.微波组和高压组按照常规加热修复法处理相应患者石蜡切片,试验组在pH为3.5±0.1的柠檬酸盐缓冲液中室温修复15 min.比较三组切片的抗原修复效果.结果 三组切片经过不同的处理方法修复后,肿瘤细胞染色结果显示,试验组染色强度及高阳性比例分布优于高压组和微波组,差异具有统计学意义(x2 =11.122、14.468、12.859、13.267,P＜0.05).综合阳性标记分数显示,试验组阳性分数多为++、+++,与高压组、微波组分布比较差异有统计学意义(x2=13.713、10.331,P＜0.01).试验组阳性率明显高于后两组,差异具有统计学意义(x2=6.199、4.475,P＜0.05).试验组经修复后的脱片率(x2=22.800、27.059,P＜0.01)及折损率(x2 =64.083、40.827,P＜0.01)均明显低于高压组、微波组.结论 常温下pH为3.5±0.1柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复,能减少组织脱片及折损的发生率,提高切片修复效果.
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高压锅水浴法修复组织抗原时的几点体会
[目的]探讨高压锅水浴法修复组织抗原的方法.[方法]烤片过夜,脱蜡至水,柠檬酸盐缓冲液高压锅加热1.2～2.0 min,冷却, PBS冲洗,余下按免疫组化步骤选择不同的抗体进行染色.[结果] 染色定位准确、均匀、清晰.一般不产生非特异性着色.[结论] 该方法简单易行,结果可靠,染色效果优于其他抗原修复方法.
