首页 > 文献资料
-
蓝藻抗病毒蛋白N基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性
目的:构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)基因原核表达载体,表达、纯化并复性其重组蛋白.方法:根据GenBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增.将扩增的PCR产物克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载体pET30a-CV-N,测序鉴定后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE和Westen blot鉴定表达产物,Ni Sepharose柱纯化目的蛋白,稀释法复性蛋白.结果:重组质粒pET30a-CV-N测序结果显示,插入片段为303 bp,与GenBank中的CV-N基因序列完全相同.经IPTG诱导的CV-N基因可在E.coli中高效表达;SDS-PAGE分析表明,相对分子质量11 000处出现一条新条带,主要以包涵体形式存在,37℃诱导2、4、6、8 h后,表达蛋白分别占菌体蛋白的3.87%、19.10%、33.98%和31.58%.Western blot结果显示,重组蛋白能与抗His单抗特异性反应.将诱导6 h的菌体超声破碎后,Ni Sepharose柱纯化,相对分子质量11 000处显示出清晰的单一条带,且蛋白复性效果良好.结论:成功地构建了CV-N原核表达载体,表达并纯化出重组蛋白,为深入研究其抗病毒的活性奠定了基础.
-
蓝藻抗病毒蛋白N的研究进展
蓝藻抗病毒蛋白N(Cyanovirin-N)简称CV-N,相对分子质量11kD,含有101个氨基酸残基,主要是由β-叠片结构形成的链状蛋白,其中有2个内部二硫键.通过基因重组表达纯化的产物,其结构和活性均与天然CV-N相同.CV-N与人类免疫缺陷病毒(HIV)包膜糖蛋白120(gp120)具有高度亲和性,并能够阻断由包膜蛋白介导的细胞融合过程从而阻止病毒的扩散.CV-N不仅能够有效地抑制多个亚型的人类免疫缺陷病毒1(HIV-1),2(HIV-2),猴免疫缺陷病毒(SIV),而且对单纯疱疹病毒、流行性感冒病毒及其他一些包膜病毒也有抑制作用.CV-N的若干特性使其有可能成为一种非常有价值的新型抗病毒药物.
-
蓝藻抗病毒蛋白N全长基因原核表达克隆的构建
目的 构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)全长基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达.方法 根据Gene Bank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增.将扩增的PCR产物经双酶切后,克隆到原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载体pET30a-CV-N.重组质粒经核苷酸测序鉴定后,转化宿主菌BL21(DE3)诱导表达目的蛋白.结果 CV-N基因可在大肠杆菌中高效表达,重组蛋白相对分子质量为11Kd,以包涵体形式存在.结论 成功地构建了CV-N原核表达载体,为CV-N的纯化及其抗病毒的活性研究奠定了基础.
