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藤梨根乙酸乙酯制剂诱导食管癌细胞凋亡机制的观察
目的：探讨藤梨根（Actinidia arguta）乙酸乙酯制剂促进人食管癌Eca-109细胞凋亡的机制。方法采用MTT比色法，检测藤梨根乙酸乙酯药液在不同浓度（1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml等）及不同时间（24h、48h、72h等）对Eca-109细胞生长抑制作用；采用TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应；采用免疫组化SP法，检测凋亡相关蛋白Bax 、Bcl-2及caspase的表达。结果藤梨根乙酸乙酯药液对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用，随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强，其生长抑制率可达87.2%。藤梨根制剂对瘤细胞有明显的凋亡效应，而在对照组，未见有明显凋亡现象。瘤细胞作用24h、48h、72h后分别与对照组比较，用药组Bax蛋白表达明显增强（P<0.01）；同时伴有Bcl-2表达减弱，72h后明显，差异有统计学意义（P<0.01）。藤梨根药液促进caspase-3、caspase-9表达明显增强，而对caspase-8表达影响较小。结论藤梨根可通过下调Bcl-2表达，激活caspase-9、caspase-3诱导Eca-109细胞凋亡。
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雷酚萜甲醚抑制人胃癌细胞AGS增殖及诱导凋亡作用研究
目的：研究雷酚萜甲醚( TME )在体外对人胃癌AGS细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用 MTT法观察TME对人胃癌AGS细胞、正常人胃黏膜上皮细胞GES-1的增殖抑制作用；克隆形成实验观察细胞克隆的形成；光镜下及AO / EB染色观察细胞形态；流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期；JC-1染色和DCFH-DA荧光探针分别检测TME对AGS细胞线粒体膜电位的改变和活性氧产生的影响；West-ern blot检测凋亡蛋白caspase-3、caspase-8和Bcl-2、Bax表达情况,以及 caspase 广谱抑制剂 z-VAD-fmk 对 caspase-3、caspase-8蛋白表达的影响。结果 TME可明显抑制人胃癌AGS细胞的增殖,并诱导其凋亡,作用48 h时IC50为23.85μmol·L-1,而对正常人胃黏膜上皮细胞GES-1的抑制作用明显低于AGS。 TME能够抑制AGS细胞克隆形成,并使细胞出现明显的凋亡形态改变。 Annexin V-FITC / PI双染实验表明,随TME剂量的增加,细胞凋亡百分数也增加。 JC-1和DCFH-DA结果显示, TME使细胞内线粒体膜电位降低、细胞内活性氧水平增加。 Western blot结果显示, TME增加了Bax / Bcl-2的比例,激活caspase-8和caspase-3,并且加入z-VAD-fmk后, caspase-3、caspase-8蛋白的表达降低。 TME可使AGS细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 TME能抑制人胃癌AGS细胞增殖和诱导凋亡,抗肿瘤作用机制与激活凋亡通路、影响细胞周期及Bcl-2蛋白家族相关。
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穿心莲内酯诱导人食管癌Ec9706细胞凋亡机制研究
目的 在前期工作基础上进一步研究穿心莲内酯(an-drographolide,AD)抑制人食营癌Ec9706细胞增殖和诱导凋亡的机制.方法 分光光度法分别检测AD处理Ec9706细胞6、12、18 h对caspase-3活性的影响以及AD处理Ec9706细胞6 h对caspase-8和caspase-9活性的影响,并用MTT法比较研究在有或无caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK时AD对Ec9706细胞增殖的影响;免疫组化法分析AD处理Ec9706细胞6 h对bcl-2基因表达的影响.结果 AD(30、60 mg·L-1)下调bcl-2基因的表达(P<0.01),提高Ec9706细胞caspase-3和casptme-9活性,对caspase-8活性无明显影响,caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK减弱AD对Ec9706的细胞毒作用.结论 AD通过下调bcl-2,激活caspase-9、caspase-3诱导Ec9706细胞凋亡.
