首页 > 文献资料
-
惊厥和亚惊厥剂量戊四唑对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响
目的:研究不同剂量戊四唑刺激对大脑皮层内N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1、NR2A和NR2B 3种亚单位表达量的影响.方法:腹腔注射亚惊厥剂量(35 mg/kg)和惊厥剂量(50 mg/kg)的戊四唑,注射后不同时间点分离大脑皮层,用免疫印迹法检测NMDA受体NR1、NR2A、NR2B 3种亚单位的蛋白含量.结果:注射戊四唑亚惊厥剂量和惊厥剂量组大鼠的行为学差异非常显著(P＜0.001),但NMDA受体3种亚单位仅NR2A亚单位在1 h点有显著性增高,且惊厥剂量组NR2A的表达量比亚惊厥剂量组高(P＜0.05).惊厥剂量组NR2A和NR2B表达有先增加再降低然后恢复至正常水平的趋势,而NR1亚单位改变不明显.结论:戊四唑引起惊厥的机制可能与戊四唑首先影响NR2亚单位蛋白的表达,以调节NMDA受体的功能有关.
关键词： 戊四唑/投药和剂量 受体 N-甲基-D-天冬氨酸/分析 -
C末端缺失NR2B亚单位表达载体的构建及其在NMDA受体装配研究中的应用
目的:研究NMDA受体NR2B亚单位细胞内C末端,在NR1-1a/NR2B亚型NMDA受体装配和表面表达中的作用.方法:构建C末端不同缺失和GFP标记的NR2B亚单位表达载体,单独转染或与NR1亚单位共转染到HEK293细胞,用抗GFP多克隆抗体和Cy3荧光素交联的二抗作活细胞表面受体染色.结果:成功构建了8个C末端不同缺失的GFP-NR2B表达质粒(GFP-NR2BΔ1～Δ8).将GFP-NR1-1a,GFP-NR2B及GFP-NR2BΔ1～Δ8分别单独转染HEK293细胞,不能获得达细胞膜表面的表达.而将这些质粒分别与NR1-1a共转染293细胞,发现GFP-NR2B及C末端部分缺失的GFP-NR2BΔ1～Δ6,均能与NR1-1a一起表达于细胞膜表面,而仅留有PDZ结合基序的GFP-NR2BΔ7和C末端全长缺失的GFP-NR2BΔ8,则不能与NR1-1a一起表达于细胞膜表面.结论:NR1-1a与NR2B的共表达和装配,是形成NR1-1a/NR2B亚型NMDA受体并表达于细胞表面的必要条件.NR2B与NR1-1a装配时,NR2B对NR1-1a C1盒中内质网滞留基序的遮蔽和阻滞作用,并不依赖于NR2B C末端某一特定的区域,相反可能仅要求有一定长度的NR2B C末端.
关键词： 受体 N-甲基-D-天冬氨酸/分析 NR2B亚单位 膜表面表达 内质网滞留 -
NMDA受体NR2A亚单位C末端突变体在HEK293细胞的共表达研究
目的:研究N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA) 受体NR2A亚单位的细胞内羧基端在受体装配和表面表达中的作用.方法:构建N末端GFP标记、C末端不同区域缺失的NR2A亚单位表达载体GFP-NR2AΔC1～GFP-NR2AΔC5,其C末端缺失区依次分别为897L-1017S、1024D-1142P、1149D-1347G、1354S-1464V和897L-1464V.将它们单独转染或与NR1亚单位共转染到HEK293细胞,用抗GFP多克隆抗体和Cy3荧光素交联的二抗作活细胞表面受体染色.结果:成功构建了5个C末端不同区域缺失的GFP-NR2A表达质粒GFP-NR2AΔC1～GFP-NR2AΔC5.将这些载体分别单独转染HEK293细胞,均不能获得达细胞膜表面表达.而将这些质粒分别与NR1-1a共转染HEK293细胞,发现它们均能与NR1-1a表达于细胞膜表面.结论:NR1-1a与NR2A的共表达是形成NR1-1a/NR2A亚型NMDA受体并获得细胞表面表达的必要条件.NR2A C末端897L下游并未找到直接与NR1-1a C1盒中内质网滞留基序相互作用的某一特定区域,也不含有决定NR2A亚单位本身细胞内滞留的区域.
关键词： 受体 N-甲基-D-天冬氨酸/分析 NR2A亚单位 内质网滞留 表面表达
