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膜表面表达文献资料
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C末端缺失NR2B亚单位表达载体的构建及其在NMDA受体装配研究中的应用
目的:研究NMDA受体NR2B亚单位细胞内C末端,在NR1-1a/NR2B亚型NMDA受体装配和表面表达中的作用.方法:构建C末端不同缺失和GFP标记的NR2B亚单位表达载体,单独转染或与NR1亚单位共转染到HEK293细胞,用抗GFP多克隆抗体和Cy3荧光素交联的二抗作活细胞表面受体染色.结果:成功构建了8个C末端不同缺失的GFP-NR2B表达质粒(GFP-NR2BΔ1～Δ8).将GFP-NR1-1a,GFP-NR2B及GFP-NR2BΔ1～Δ8分别单独转染HEK293细胞,不能获得达细胞膜表面的表达.而将这些质粒分别与NR1-1a共转染293细胞,发现GFP-NR2B及C末端部分缺失的GFP-NR2BΔ1～Δ6,均能与NR1-1a一起表达于细胞膜表面,而仅留有PDZ结合基序的GFP-NR2BΔ7和C末端全长缺失的GFP-NR2BΔ8,则不能与NR1-1a一起表达于细胞膜表面.结论:NR1-1a与NR2B的共表达和装配,是形成NR1-1a/NR2B亚型NMDA受体并表达于细胞表面的必要条件.NR2B与NR1-1a装配时,NR2B对NR1-1a C1盒中内质网滞留基序的遮蔽和阻滞作用,并不依赖于NR2B C末端某一特定的区域,相反可能仅要求有一定长度的NR2B C末端.
关键词： 受体 N-甲基-D-天冬氨酸/分析 NR2B亚单位 膜表面表达 内质网滞留
