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微小RNA-29 b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制
目的:研究微小RNA(miRNA)-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制.方法:构建miRNA-29b重组慢病毒表达载体lenti-miRNA-29b转染293T细胞获得重组慢病毒,提纯慢病毒颗粒感染乳腺癌细胞 MCF-7.通过绿色荧光蛋白肿瘤细胞比例来验证转染情况;实时定量PCR 检测miRNA-29b的表达水平;CCK-8实验和Transwell实验检测miRNA-29b过表达后乳腺癌细胞生物学行为的变化.采用生物信息学软件对miRNA-29b调控的下游靶基因进行预测和筛选,使用双荧光素酶检测、实时定量PCR和蛋白质印迹法进行验证.对筛选出的miRNA-29b调控的下游靶基因RTKN通过siRNA-RTKN验证其对MCF-7细胞的增殖和迁移的影响.结果:成功构建了miRNA-29b的重组慢病毒表达载体.感染乳腺癌细胞MCF-7后,lenti-miRNA-29b组和空载体转染组分别有90%和60%左右的细胞出现绿色荧光;lenti-miRNA-29b组miRNA-29b表达量较空载体转染组和空白对照组显著增加(均P<0.05),MCF-7细胞的增殖和迁移能力较空载体转染组显著减弱(均P<0.05).RTKN的基因编码3'UTR区中具有miRNA-29b的结合位点;野生型RTKN-WT-3'UTR报告基因载体与lenti-miRNA-29b共转染MCF-7细胞后可使荧光素酶的活性显著下降(P<0.05).转染siRNA-RTKN后,MCF-7细胞中RTKN蛋白的水平显著下降,细胞增殖和迁移能力显著减弱(均P<0.05).结论:miRNA-29b能够通过抑制RTKN的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力.
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长链非编码RNA RP11-770J1.3和跨膜蛋白25对紫杉醇耐药人乳腺癌细胞株耐药性的影响
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-770J1.3 和跨膜蛋白25(TMEM25)对紫杉醇耐药人乳腺癌细胞株耐药性的影响.方法:利用实时定量PCR 检测lncRNA RP11-770J1.3 和TMEM25 在人乳腺癌细胞MCF-7 和紫杉醇耐药细胞株(MCF-7/PR)中的表达.在MCF-7/PR 中转染lncRNA RP11-770J1.3 和TMEM25 的干扰片段,磺酰罗丹明B 法检测MCF-7/PR 对紫杉醇药物敏感性的变化,并运用实时定量PCR 和蛋白质印迹法检测多药耐药相关蛋白(MRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、多药耐药基因1(MDR1)及其编码产物P-gp mRNA 和蛋白水平的改变.结果:lncRNA RP11-770J1.3 和TMEM25 在MCF-7/PR 中表达上调(P <0.05 或P <0.01).与空白对照组和紫杉醇阴性对照组比较,干扰lncRNA RP11-770J1.3 和TMEM25 的表达可以提高MCF-7/PR 对紫杉醇的药物敏感性,并下调耐药相关基因MRP、BCRP、MDR1 及其编码产物P-gp 的表达(均P <0.05);与单独干扰lncRNA RP11-770J1.3 或TMEM25 比较,同时干扰lncRNA RP11-770J1.3 和TMEM25 的作用更加明显(P <0.05).结论:MCF-7/PR 中lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25 的表达上调,联合干扰lncRNA RP11-770J1.3 和TMEM25 的表达可以提高MCF-7/PR 对紫杉醇的敏感性.
