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microRNA-101a在尿酸诱导的肾小管上皮细胞转分化中的作用
目的研究尿酸对肾小管上皮细胞间充质转分化的影响及microRNA-101a在其中的作用。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E），分别以0、10、100、500μmol/L的尿酸诱导细胞，采用实时定量PCR检测各组α-平滑肌肌动蛋白（α- SMA）、I型胶原（ColⅠ）及E钙蛋白mRNA的表达水平；Wersten blot检测各组中α- SMA的表达，免疫荧光检测各组中胶原蛋白I（COL）表达水平，观察细胞是否发生转分化。再用实时定量PCR检测各组中miR-101a及COX-2mRNA的表达水平，Wersten blot检测各组中COX-2的表达。进一步实验选择100μmol/L尿酸诱导细胞，并转染miR-101a mimics，分为3组，miR-101a组：先转染miR-101a mimics，再以100μmol/L尿酸培养基培养；空白对照组：以100μmol/L尿酸培养基培养；阴性对照组：细胞转染随机合成的miRNA NC片段，再以100μmol/L尿酸培养基培养。检测各组中α- SMA、ColⅠ、E钙蛋白及COX-2mRNA的表达量。结果培养基中尿酸浓度越高，α- SMA、ColⅠ表达水平也越高，E钙蛋白越低，提示细胞发生转分化，同时miR-101a表达减少，COX-2mRNA表达增多。miR-101a组与空白对照组和阴性对照组比较，α- SMA、ColⅠ及COX-2的表达明显降低（P＜0.05），E钙蛋白明显升高（P＜0.05），空白对照组与阴性对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论尿酸诱导肾小管上皮细胞转分化可能呈浓度依赖性， miR-101a及COX-2可能参与尿酸诱导肾小管上皮细胞转分化的调节过程。
