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白芍总苷对内毒素性心肌炎大鼠心肌组织炎症因子的影响
目的研究白芍总苷（TGP）对内毒素性心肌炎大鼠心肌组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、NF-κB表达的影响。方法通过尾静脉注入脂多糖（LPS）建立内毒素性心肌炎大鼠模型，分别以低、中、高剂量的TGP进行干预，光镜观察大鼠心肌组织的病理学变化，免疫组化检测心肌组织TNF-α、IL-1β、NF-κB的表达水平。结果光镜观察发现模型组大鼠心肌组织炎症反应明显，较多炎症细胞浸润；TGP中、高剂量组大鼠心肌组织炎症反应较轻，有少量炎症细胞浸润；低剂量组大鼠心肌组织炎症坏死程度介于模型组和中剂量组之间。免疫组化检测提示TGP中、高剂量组TNF-α、IL-1β、NF-κB的表达明显减少，与模型组比较均有统计学差异（均P＜0.01）；TGP低剂量组的TNF-α、IL-1β表达与模型组均无统计学差异（均P＞0.05），而NF-κB的表达与模型组有统计学差异（P＜0.05）。结论 TGP能有效抑制内毒素性心肌炎大鼠心肌组织炎症反应，减轻心肌损伤，在中、高剂量时效果明显。
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划痕损伤对大鼠大脑皮层微血管内皮细胞NF-κB表达及继发性死亡的影响
目的：通过体外培养SD大鼠大脑皮层微血管内皮细胞并制作划痕损伤模型，观察划痕损伤对脑微血管内皮细胞NF-κB表达及其自噬、凋亡和坏死的影响。方法体外培养SD大鼠大脑皮层微血管内皮细胞并制作划痕损伤模型，应用NF-κB抑制剂吡咯醛二硫氨基甲酸（PDTC）干预划痕损伤脑微血管内皮细胞。随机分为对照组、单纯损伤组、损伤+抑制组，在不同时间点（损伤后1、6、12、24及48 h）分别应用免疫荧光细胞化学法测定磷酸化NF-κB p65蛋白的表达，Annexin V/PI染色法检测凋亡、坏死，Western blot检测自噬蛋白LC3Ⅱ表达情况。对照组为无划痕损伤的脑微血管内皮细胞。结果脑微血管内皮细胞划痕损伤后NF-κB蛋白表达于伤后1 h开始表达增强，于24 h达高峰，与对照组比较差异有统计学意义（<0.05）。凋亡、坏死及自噬各指标均随时间推移有不同程度升高，与对照组比较差异有统计学意义（<0.05）。而经PDTC处理后上述变化均受不同程度的抑制，与单纯损伤组相比差异有统计学意义（<0.05）。结论划痕损伤后可激活脑微血管内皮细胞NF-κB表达，同时可引起脑微血管内皮细胞的自噬、凋亡和坏死。
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大鼠siTLR4重组腺病毒载体的构建及功能鉴定
目的 构建特异性针对大鼠TLR4基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究TLR4在不同疾病中的免疫调节机制奠定重要基础.方法 设计并合成3对大鼠TLR4基因的siRNA序列,退火处理后定向克隆到pSES-HUS穿梭质粒中,获得pSES-HUS siTLR4,经Pme Ⅰ线性化后与pAdEasy-1骨架质粒在BJ5183细菌中进行同源重组,从而构建pAd-siTLR4质粒,通过脂质体转染,在HEK293细胞中包装形成Ad-siTLR4腺病毒颗粒,用该病毒感染PC12细胞,从基因和蛋白质水平分别检测3对siTLR4的抑制效果,同时从蛋白质水平检测TLR4 下游关键分子NF-κB的表达.结果 PCR、酶切和测序均证实目的基因正确克隆到所构建的pAd siTLR4重组腺病毒载体中;经包装获得的Ad -siTLR4病毒颗粒在PC12细胞中能够有效地抑制TLR4 mRNA和蛋白水平的表达,并显著地降低了NF- κB的表达.结论 成功构建了pAd-siTLR4重组腺病毒质粒,同时包装获得了 Ad -siTLR4重组腺病毒,转染PC12细胞后不仅能明显降低TLR4的表达,而且有效地抑制了TLR4通路下游关键分子NF-κB的表达.
