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建立DBT细胞模型比较药物对MHV-A59病毒的抗毒作用
目的:利用病毒学方法建立对小鼠肝炎病毒(MHV-A59)易感的星形胶质瘤细胞(DBT)模型,在细胞水平上建立抗冠状病毒药物的筛选的实验方法.方法:通过测定细胞病变效应(CPE)的半定量法及噬斑定量法测定组织培养感染量(TCID50);以PEG沉淀法部分纯化病毒,利用免疫学方法免疫动物制备抗MHV-A59的多克隆抗体;以血清学方法进行中和实验及酶联免疫方法定量测定病毒抗体的滴度及特异性;以100倍的TCID50病毒量感染细胞同时加不同稀释度的药物,在同一条件下,动态观察不同时间的细胞的CPE变化.以能保护CPE<50%为阳性.并比较药物的低抗毒浓度.结果:制备的抗体对MHV病毒具有特异性的翻转作用;合成新药Cinanserin和Pkumdl-cvs-1003 对MHV所致的细胞感染具有不同程度的保护作用.结论:建立的MHV-A59敏感的DBT细胞模型可以用于抗冠状病毒药物的筛选.
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星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞骨架的光镜和电镜观察
目的观察正常星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞系SWO-38的细胞骨架的区别。方法分别用光镜和电镜观察正常星形胶质细胞和SWO-38的细胞骨架。结果和结论两种方法都很清晰地显示出微管和微丝。正常星形胶质细胞微管和微丝发达，属丰满型；粗大的张力纤维贯穿细胞全长，接近平行分布，偶见交叉呈"Z"形状。而SWO-38细胞的微管则明显减少，属稀疏型；细胞中仅见少量纤细的张力纤维，多数微丝束形成点状或树根状肌动蛋白小体，微管和微丝呈收缩趋势。
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星形胶质瘤细胞GFAP的缺失对细胞周期相关蛋白的影响
目的:应用RNA干扰(RNAi)方法下调胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)基因表达,研究GFAP对星形胶质瘤细胞U251细胞增殖的影响及可能的作用机制.方法:采用小分子RNA干扰(Small interfering RNA,siRNA)技术特异性的干扰U251细胞中内源性GFAP的表达,并通过RT-PCR和Western blot技术检测U251细胞中GFAP的mRNA和蛋白表达水平,确定干扰效率.Western blot技术检测si-NC和si-GFAP转染48 h后,U251细胞中GFAP、CREB、cyclinD1、CDK2、CDK4、CDK6、p15、p18、p27、Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白表达变化;MTT检测各组的细胞增殖情况.结果:(1)在U251细胞中特异性的抑制GFAP表达,抑制细胞增殖,降低细胞总RNA和总蛋白含量(si-NC组vs.si-GFAP组:t=3.962,P=-0.017;t=3.833,P=0.019).(2)在U251细胞中干扰GFAP表达,显著性抑制CREB(si-NC组vs.si-GFAP组:t=4.834,P=0.008)、cyclin D1(si-NC组vs.si-GFAP组:t=3.610,P=0.023)、CDK2(si-NC组vs.si-GFAP组:t=6.678,P=0.003)和CDK4(si-NC组vs.si-GFAP组:t=4.530,P=0.011)的表达水平;并且显著性提高细胞周期依赖性激酶抑制因子pl8(si-NC组vs.si-GFAP组:t=-3.339,P=0.029)和p27(si-NC组vs.si-GFAP组:t=13.859,P=0.000)的蛋白表达水平.(3)MTT检测结果显示24和48 h时si-GFAP组细胞生长速度明显低于si-NC组(si-NC组vs.si-GFAP组:t=6.389,P=0.000;t=6.058,P=0.000),差异有统计学意义.(4)在U251细胞中抑制GFAP表达,对凋亡相关蛋白Bax(si-NC组vs.si-GFAP组:t=-0.657,P=0.547)、Bcl-2(si-NC组vs.si-GFAP组:t=-0.991,P=0.378)和Caspase 3 (si-NC组vs.si-GFAP组:t=-1.848,P=0.138)的表达无明显影响.结论:在U251细胞中抑制GFAP的表达,影响细胞周期相关蛋白的表达,从而抑制细胞的增殖.
