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骨形态蛋白9诱导干细胞骨向分化与环氧酶-2及PI3K/Akt的关系研究
目的 研究骨形态蛋白9(BMP9)诱导干细胞成骨分化过程中对PI3K/Akt信号的激活与环氧酶-2(COX-2)的关系.方法 利用组织化学染色法、化学发光法或定量PCR检测碱性磷酸酶(ALP)的水平,Western blot检测骨桥素(OPN)、骨钙素(OCN)、COX-2、Akt1/2和磷酸化Akt1/2(p-Akt1/2)水平,RT-PCR检测COX-2的表达,用免疫组化或免疫荧光分别检测COX-2的表达水平以及Akt1/2的磷酸化水平,用茜素红染色检测钙盐沉积.结果 BMP9在C2C12细胞中明显增加ALP活性,促进OPN和OCN表达以及钙盐沉积;BMP9对Akt1/2总蛋白无明显影响,能明显增加Akt1/2磷酸化水平, PI3K抑制剂呈浓度依赖性减弱BMP9诱导ALP活性增加.BMP9在C2C12细胞中促进COX-2表达,抑制COX-2明显减弱BMP9在C2C12细胞中诱导ALP活性增加和钙盐沉积的作用.外源性过表达COX-2促进BMP9诱导p-Akt1/2水平增加,而抑制COX-2则明显减弱BMP9诱导Akt1/2磷酸化水平增加.结论 BMP9在诱导干细胞成骨化过程中对PI3K/Akt信号的激活可能与其促进COX-2表达有关.
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白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖的作用与促进骨形态蛋白9及其受体表达的关系研究
目的：研究白藜芦醇（resveratrol，Res）对人结肠癌Lo-Vo细胞增殖的抑制作用与骨形态蛋白9（bone morphorgenet-ic protein 9，BMP9）之间的可能关系。方法采用结晶紫染色与流式细胞术检测Res对LoVo细胞增殖的抑制作用；流式细胞术检测Res对LoVo细胞凋亡的诱导作用。利用RT-PCR和Western blot检测Res在LoVo细胞中对BMP9表达的影响，以及对 BMP9的受体 ALK2和 ALK3表达的影响。采用ALK2和ALK3的抑制剂，通过结晶紫染色分析BMP9介导Res抑制LoVo细胞增殖的可能机制。结果与对照组相比，Res明显呈浓度依赖性抑制 LoVo 细胞增殖，并诱导LoVo细胞发生S期阻滞；Res呈浓度依赖性增加LoVo细胞凋亡比例；Res促进BMP9的mRNA表达并明显增加其蛋白水平；外源性过表达BMP9能增强Res对LoVo细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用；Res 能诱导 BMP9的受体 ALK2和ALK3的mRNA表达，抑制ALK2和ALK3能明显促进LoVo细胞增殖，并减弱Res对LoVo细胞增殖的抑制作用。结论Res 对LoVo 细胞的增殖具有明显抑制作用，这种作用可能与Res 促进BMP9及其受体表达有关。
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环氧酶-2在骨形态蛋白9诱导间充质干细胞骨向分化中的作用研究
目的：研究环氧酶-2（COX-2）在骨形态蛋白9（BMP9）诱导间充质干细胞（MSCs）成骨分化过程中的作用，以及COX-2影响BMP9功能的可能机制。方法采用定量PCR、蛋白印迹和免疫细胞化学染色分析BMP9对COX-2表达的影响。采用化学发光法检测碱性磷酸酶（ALP）的活性，用RT-PCR法检测Smad6、Smad7 mRNA表达水平，用蛋白印迹检测Runx2、Dlx-5、Smad1／5／8及磷酸化 Smad1／5／8蛋白水平。通过体内异位成骨实验检测COX-2对BMP9诱导MSCs成骨分化的影响。利用萤光素酶报告质粒检测BMPs／Smads信号活化程度。结果 BMP9明显诱导 COX-2表达，抑制COX-2酶活性或沉默COX-2均抑制BMP9诱导C3H10T1／2细胞 ALP 活性增加。沉默 COX-2明显抑制 BMP9诱导C3H10T1／2细胞表达 Runx2和 Dlx-5，以及 BMP9诱导的C3H10T1／2细胞异位成骨。沉默COX-2抑制BMPR-Smad报告质粒萤光素酶活性，降低Smad1／5／8的磷酸化水平，以及抑制 Smad6和 Smad7的 mRNA 表达。结论 COX-2对BMP9诱导MSCs成骨分化具有重要调节作用，其机制可能与COX-2调节BMPs／Smads信号转导有关。
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全反式维甲酸增强骨形态蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化作用
目的 研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对骨形态蛋白9(bone morphogenetie protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞成骨分化的影响及可能机制.方法 采用组织化学染色检测各组第5、7天碱性磷酸酶活性变化.Western blot检测各组第9、11天骨桥素蛋白表达水平.茜素红染色检测各组第14、20天钙盐沉积水平.采用Western blot检测各组Smad-1/5/8蛋白磷酸化水平,以及用荧光素酶报告质粒检测BMPR-Smad信号通路的活化程度.结果 ATRA及BMP9均诱导C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶活性升高,但ATRA合并BMP9组碱性磷酸酶活性明显强于单用ATRA或BMP9组；BMP9合并ATRA组骨桥素蛋白表达水平高于BMP9组；BMP9合并ATRA较单用BMP9能明显促进钙盐沉积.BMP9合并ATRA组Samdl/5/8磷酸化水平明显强于单用BMP9组,BMPR-Smad报告质粒荧光素酶活性也呈相同变化趋势(P＜0.01).结论 ATRA能增强BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的作用,其机制可能与促进Smads信号转导活性有关.
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ATRA与BMP9对人骨肉瘤细胞增殖及分化作用的研究
目的 研究全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)与骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)对人骨肉瘤细胞增殖及分化的影响.方法 利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分析细胞增殖情况;蛋白质免疫印迹实验(Western blot)检测细胞增殖和成骨相关指标;半定量PCR及Western blot分析ATRA和ATRA与BMP9联用处理143B细胞株后对BMP9表达水平的影响.结果 在人骨肉瘤143B细胞株中,与对照组相比,ATRA能明显抑制细胞增殖(P＜0.05),并促使细胞周期阻滞在G1期(P＜0.05),下调PCNA的蛋白水平,并呈浓度依赖性;ATRA能呈浓度依赖性增加晚期成骨指标OCN和OPN的蛋白水平(P＜0.05);ATRA能上调BMP9的mRNA及蛋白水平,并呈浓度依赖性(P＜0.05);单用BMP9并不能上调OCN和OPN表达,并促进其增殖(P＜0.05),但与ATRA联用时,能够增强ATRA诱导的相关成骨指标表达和抗增殖作用(P＜0.05).结论 ATRA对143B细胞的增殖具有抑制作用并诱导其成骨分化,并可能恢复BMP9的成骨诱导能力.
