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炎症应激通过激活 mTOR通路诱导THP－1巨噬细胞泡沫化的实验研究
目的：研究脂多糖（ LPS）诱导的炎症应激是否通过激活 mTOR 通路，增加 SCAP／SREBP2表达，干扰 SCAP／SREBP2负反馈调控，增加THP－1巨噬细胞对非修饰低密度脂蛋白胆固醇（ LDL）摄取，导致泡沫细胞形成。方法诱导分化成功的THP－1源性巨噬细胞在无血清培养基中培养4 h后，分为对照组（5 mg? L－1 LDL）、炎症刺激组（5 mg? L－1 LDL＋200μg? L－1 LPS）、炎症＋雷帕霉素组（5 mg? L－1 LDL＋200μg? L－1 LPS＋10μg? L－1 Rapamycin ）。以上各组细胞培养24 h后收获。油红O染色法检测各组细胞内脂质沉积情况， Real－time PCR 法检测 LDLr、SREBP2、SCAP、S6K1和 mTOR mRNA 水平， Western blot 法检测 LDLr、S6K1、mTOR蛋白表达，激光共聚焦法检测SCAP 在内质网与高尔基体间的转位情况。结果油红O染色发现，炎症应激增加THP－1巨噬细胞内脂质沉积，雷帕霉素抑制炎症应激诱导的脂质聚积。 Real－time PCR 检测显示，炎症应激上调THP－1巨噬细胞 LDLr、SREBP2、SCAP、S6K1和 mTOR mRNA水平（ P＜0．05），雷帕霉素减少炎症应激诱导的LD－Lr、SREBP2、SCAP、S6 K1和 mTOR mRNA 水平升高（ P ＜0．05）。 Western blot检测发现，炎症应激上调LDLr、S6K1和mTOR蛋白表达（ P＜0．05），雷帕霉素减少炎症应激诱导的LDLr、S6K1和mTOR蛋白表达水平升高（ P＜0．05）。激光共聚焦检测发现，炎症应激增加SCAP／SREBP2从内质网转位到高尔基体，雷帕霉素则抑制炎症应激诱导的 SCAP／SREBP2复合物从内质网转位到高尔基体。结论炎症应激通过激活mTOR通路，上调SCAP／SREBP2表达，致SCAP／SREBP2复合体转位至高尔基体异常增加，LDLr表达上调，致使胆固醇聚积于细胞内，泡沫细胞形成。雷帕霉素能够逆转炎症应激诱导mTOR通路激活，减少细胞内胆固醇沉积，提示炎症应激状态下，mTOR可能是泡沫细胞形成的关键通路。
