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肉苁蓉苯乙醇总苷对血小板衍生生长因子诱导的肝星状细胞增殖的影响及机制
目的：探讨肉苁蓉苯乙醇总苷( CPhGs)抑制血小板衍生生长因子-BB( rrPDGF-BB)介导的大鼠肝星状细胞( HSC)增殖活化作用及对PDGF/ERK1/2信号通路表达的影响。方法培养 HSC 细胞,体外给予不同浓度(0、3．91、7．81、15．63、31．25、62．50、125．00、250．00和500．00 mg · L-1)的CPhGs测定半数抑制率(IC50),选取25、50、75、100 mg·L-1的CPhGs, rrPDGF-BB 刺激后,通过四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞的增殖；采用荧光定量PCR(RT-PCR)检测ERK1/2、α-SMA、c-fos、c-jun和Collagen I mRNA的表达；进一步采用Western blot 法检测 CPhGs 对 PDGF/ERK1/2通路中ERK1/2、P-ERK1/2和 Collagen I 蛋白的表达。结果(50~100) mg·L-1的CPhGs可以抑制rrPDGF-BB诱导的HSC的增殖(P<0．05)；(25~100) mg·L-1剂量组的CPhGs均可抑制ERK1/2、α-SMA、c-fos、c-jun和 Collagen Ⅰ mRNA 水平的表达,并且明显抑制 ERK1/2、P-ERK1/2和 Collagen Ⅰ通路蛋白的表达。结论 CPhGs的抗肝纤维化作用可能与其阻断PDGF/ERK1/2通路进而阻断HSC的活化、增殖有关。
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肉苁蓉苯乙醇总苷微乳的制备及质量评价
目的：制备肉苁蓉苯乙醇总苷微乳制剂，并对其质量进行评价。方法采用滴定法制备微乳，高效液相色谱法测定制剂中松果菊苷、毛蕊花糖苷的含量。结果所制备的微乳外观澄清透明，电镜下乳滴呈圆形或椭圆形，平均粒径16.6 nm， pH值为5.1～6.9，黏度为5.42 mm2·s-1，8000× g离心30 min未见分层；微乳中松果菊苷、毛蕊花糖苷平均含量分别为7.337，3.596 mg·mL-1， RSD分别为1.29%、1.60%。结论肉苁蓉苯乙醇苷微乳制备工艺简单，性质稳定；所建立的高效液相测定方法具有简单、专属、稳定、可重复性的特点，可用于肉苁蓉苯乙醇苷中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量测定。
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肉苁蓉苯乙醇总苷对大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smad信号通路表达的影响
目的:探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(CPhGs)对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖活化作用及对TGF-β1/Smad信号通路表达的影响.方法:试验分为正常对照组、5 ng/mL TGF-β1刺激的HSC-T6模型组、5 ng/mL TGF-β1+不同终浓度(25、50、75和100 μg/mL)CPhGs给药组,另设只加DMEM培养液的空白组.体外培养HSC-T6细胞,通过四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞的增殖;LDH比色法测定CPhGs的细胞毒性;采用荧光定量PCR(qPCR)检测Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达;采用Western blot法检测Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3和Smad7蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,TGF-β1模型组显著促进了HSC-T6细胞的增殖,而50～100 μg/mL的CPhGs可以抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的增殖(P＜0.05),且25～100 μg/mL的CPhGs对HSC-T6无明显细胞毒性作用;25～100 μg/mL CPhGs均可抑制Smad2和Smad3 mRNA和蛋白水平的表达,且明显抑制Smad2和Smad3蛋白的磷酸化水平,促进Smad7 mRNA和蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:CPhGs的抗肝纤维化作用可能与其阻断TGF-β1/Smad通路进而阻断HSC-T6细胞的活化和增殖有关.
