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NF-κB靶向性哑铃形"圈套"寡核苷酸对海马神经元及神经元样细胞中COX-2表达的影响
目的 设计合成靶向性NF-κB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对神经元样细胞及海马神经元中NF-κB及环氧化酶-2 (COX-2) 的抑制作用.方法 采用NF-κB 靶向性哑铃形圈套ODNs转染培养的PC12细胞,用Western blot方法 对PC12细胞内NF-κB和COX-2的蛋白表达进行分析;转染培养的海马神经元再经LPS刺激后,用RT-PCR法检测COX-2 mRNA.结果 经靶向性NF-κB哑铃形圈套ODNs处理的PC12细胞中NF-κB的表达明显降低(P<0.01),同时伴有COX-2表达明显减少(P<0.01);海马神经元中COX-2 mRNA的表达明显降低(P<0.01).结论 靶向性NF-κB的哑铃形圈套ODNs可抑制神经元样细胞及神经细胞中NF-κB和COX-2的表达,且NF-κB对COX-2具有调控作用.
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NF-kB靶向性哑铃形"圈套"寡核苷酸对肾小球系膜细胞TNF-α的表达抑制作用的研究
目的:本实验设计合成靶向NF-kB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对肾小球系膜细胞TNF-α表达的抑制效应.方法:以NF-kB顺式作用元件kB序列为模板,设计包含两个拷贝的kB序列,长度为58个碱基的环状ODNs,合成后部分序列做FAM标记,行转染效率鉴定实验.提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组.采用阳离子脂质体将2、4、8 mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6h后用LPS刺激,收集转染后8、12、18上清和细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清TNF-α蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测TNF-amRNA转录.结果:阳离子脂质体可将哑铃形圈套ODNs高效转染入肾小球系膜细胞;4、8mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞TNF-α转录和表达.结论:靶向NF-kB的哑铃形圈套ODNs对体外培养的肾小球系膜细胞炎性因子TNF-α的表达具有抑制效应.
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NF-κB靶向性哑铃形"圈套"寡核苷酸体外抑制细胞因子表达效应的研究
目的设计合成靶向NF-κB的哑铃形"圈套"ODNs,并检测其对NF-κB转录活性和肾小球系膜细胞细胞因子(TNF-α和IL-6)表达的抑制效应.方法采用电泳迁移率改变实验(EMSA)体外检测哑铃形圈套ODNs对NF-κB转录活性的抑制效应.提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组.采用阳离子脂质体将2、4和8 mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6 h后用LPS刺激,收集转染后8、12和18上清和细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清细胞因子蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测细胞因子mRNA转录.结果哑铃形圈套ODNs在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;4、8 mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞TNF-α和IL-6转录与表达.结论靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而对体外培养的肾小球系膜细胞细胞因子的表达具有抑制效应.
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NF-κB靶向性哑铃形"圈套"寡核苷酸对体外肾小球系膜细胞细胞因子表达的影响
目的:设计合成靶向NF-κB的哑铃形"圈套"ODNs,并检测其对NF-κB转录活性和肾小球系膜细胞细胞因子(TNF-α和IL-6)表达的抑制效应.方法:以NF-κB顺式作用元件κB序列为模板,设计包含两个拷贝的κB序列,长度为58个碱基的环状ODNS,合成后部分序列做FAM标记,行转集效率鉴定实验.采用电泳迁移率改变实验(EMSA)体外检测哑铃形圈套ODNs对NF-κB转录活性的抑制效应.提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组.采用阳离子脂质体将2、4、8 mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6 h后用LPS刺激,收集转染后8、12、18上清和细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清细胞因子蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测细胞因子mRNA转录.结果:阳离子脂质体可将哑铃形圈套ODNs高效转集入肾小球系膜细胞,哑铃形圈套ODNs在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;4、8 mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞TNF-α和IL-6转录与表达.结论:靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而对体外培养的肾小球系膜细胞细胞因子的表达具有抑制效应.
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NF-κB靶向性哑铃形"圈套"寡核苷酸抑制肾小球系膜细胞IL-6的表达
目的设计合成靶向NF-κB的哑铃形"圈套"ODNs,并检测其对NF-κB转录活性和肾小球系膜细胞IL-6表达的抑制效应.方法采用电泳迁移率改变实验(EMSA)体外检测哑铃形圈套ODNs对NF-κB转录活性的抑制效应.提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组.采用阳离子脂质体将2、4、8 mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6 h后用LPS刺激,收集转染后8、12、18 h上清和细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清IL-6蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测IL-6 mRNA转录.结果哑铃形圈套ODNs在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;4、8 mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞IL-6转录和表达.结论靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而对体外培养的肾小球系膜细胞炎性因子IL-6的表达具有抑制效应.
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NF-κB靶向性哑铃形"圈套"寡核苷酸对肾小球系膜细胞细胞因子表达的影响
目的设计合成靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对NF-κB转录活性和肾小球系膜细胞细胞因子(IL-6和TGF-β1)表达的抑制效应.方法采用电泳迁移率改变实验(EMSA)体外检测哑铃形圈套ODNs对NF-κB转录活性的抑制效应.提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组.采用阳离子脂质体将2、4、8 mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6h后用LPS刺激,收集转染后8、12、18上清和细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清细胞因子蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测细胞因子mRNA转录.结果哑铃形圈套ODNs在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;4、8 mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞IL-6和TGF-β1转录与表达.结论靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而对体外培养的肾小球系膜细胞细胞因子的表达具有抑制效应.
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NF-κB靶向性哑铃形圈套寡核苷酸抑制肾小球系膜细胞TGF-β1的表达
目的:设计合成靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对NF-κB转录活性和肾小球系膜细胞TGF-β1表达的抑制效应.方法:采用电泳迁移率改变实验(EMSA)体外检测哑铃形圈套ODNs对NF-κB转录活性的抑制效应.提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组.采用阳离子脂质体将2,4,8 mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6 h后用LPS刺激,收集转染后8,12,18 h上清和细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清TGF-β1蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测TGF-β1mRNA转录.结果:哑铃形圈套ODNs在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;4,8 mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1转录和表达.结论:靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而对体外培养的肾小球系膜细胞炎性因子TGF-β1的表达具有抑制效应.
