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短尾蝮蛇毒纤溶酶原激活剂的分离纯化及活性测定
目的 从短尾蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶原激活剂(plasminogen activator of Gloydius brevicaudus venom,GBV-PA),对其理化性质及部分生物活性进行研究.方法 应用苯甲脒-琼脂糖凝胶(Benzamidine Sepharose 6B)亲和层析及Lichrospher C18反相层析柱进行分离纯化,应用SDS-PAGE测定分子量、聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳测定等电点,以发色底物法测定生物活性.结果 通过亲和层析、反相层析等方法可从短尾蝮蛇毒中分离纯化出纤溶酶原激活剂至电泳纯以上,其相对分子质量约为32.6×103,等电点约为5.2,能特异激活人纤溶酶原为纤溶酶,其比活性为2.87 t-PA IU·mg-1;该酶为丝氨酸蛋白酶,对纤维蛋白无亲和性.结论 应用亲和层析和反相层析可从短尾蝮蛇毒获得一种纤溶酶原激活剂;该酶为丝氨酸蛋白酶,对纤维蛋白无亲和性.
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双抗体夹心-酶联免疫吸附法测定家兔血清中短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的浓度及其药动学研究
目的:建立测定家兔血清中短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白(PBAP)浓度的方法,并考察其药动学特征.方法:取家兔随机分为低、高剂量组(短尾蝮蛇毒PBAP,0.4,0.8 mg·kg(-1))和阴性对照组(生理盐水),每组5只,耳缘静脉单次给予相应药物,给药前及给药后1,5,15,30,60,120,240,480 min分别从颈总动脉取血,加入到短尾蝮蛇毒PBAP抗体包被酶标板(浓度为100 μg·mL(-1))中,以给药前的正常血清作为空白对照,用双抗体夹心-酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同时间点血清中短尾蝮蛇毒PBAP的浓度,并用DAS 2.0软件计算其药动学参数.结果:短尾蝮蛇毒PBAP检测浓度的线性范围为0.002 4～10 μ·mL(-1)(r=0.970 3),平均回收率为98.78%,平均板内变异系数为7.96%,平均板间变异系数为10.94%;低、高剂量短尾蝮蛇毒PBAP的主要药动学参数分别为t1/2α(9.553±4.668),(9.873±1.433) min,t1/2α(201.295±66.060)、(205.798±76.834) min,cmax (0.685± 0.160),(2.333±0.478) mg·L(-1),AUC0～8(27.114±1 2.781),(61.625 ±11.631) mg·min· L(-1).结论:ELISA法准确、灵敏、特异性强,可用于短尾蝮蛇毒PBAP在家兔血清中的药动学研究.
