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弓形虫表面抗原SAG3基因的克隆与表达
目的 克隆表达弓形虫RH株SAG3基因,为深入研究其结构及功能奠定基础.方法 从弓形虫RH株基因组DNA中特异性扩增出编码SAG3基因的片段,相应酶切后克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建pET-SAG3重组质粒.将pET30-SAG3重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株.经EcoRⅠ、 HindⅢ酶切及测序鉴定后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达情况.结果 体外扩增的SAG3基因片段与目的片段大小相符约1155bp,成功构建了重组表达质粒pET30-SAG3, SDS-PAGE、 Western blot显示SAG3-His融合蛋白的分子量大小约为50kd.结论 弓形虫表面抗原SAG3基因在大肠杆菌中成功表达,为进一步研究SAG3的结构和功能奠定基础.
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弓形虫表面抗原SAG3基因片段克隆及序列测定
目的克隆弓形虫ZS2及RH株SAG3表面抗原基因片段,并进行序列分析.方法设计合成引物,从弓形虫ZS2、RH及ZS1株基因组DNA中分别特异扩增出编码SAG3抗原的基因片段.扩增的目的片段经纯化后用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后,克隆到原核表达质粒pGEX-4T-2中,转化入大肠杆菌JM109,用PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定,并进行序列的测定.结果从弓形虫ZS2、RH和ZS1株DNA中扩增出1176bp的SAG3基因,构建重组质粒pGEX-4T-2-SAG3(pGEX-SAG3),酶切产物的大小分别与预期相符.结论成功地对弓形虫ZS2、RH和ZS1株SAG3基因进行体外扩增及构建原核表达重组质粒pGEX-SAG3,并经酶切及序列分析所验证,为弓形虫SAG3表面抗原的表达、体外诊断研究做好准备.
