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抗李斯特氏菌溶血素单克隆抗体制备及检测LMO的初步应用
目的 制备抗李氏溶血素单克隆(LLO)抗体,初步应用单克隆抗体检测LMO.方法 以重组LLO为免疫原,以天然LLO为筛选蛋白,通过淋巴细胞杂交瘤技术,制备抗LLO单克隆抗体;以ELISA、Western blot等方法 对单克隆抗体进行鉴定;以阻断ELISA法进行检测LMO的探索.结果 获得了1株稳定分泌抗LLO单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C4,经鉴定此单抗为IgG1型,属κ链抗体,杂交瘤细胞染色体数目在85～103.ELISA和Western blot实验表明此单抗对LLO有较好的结合能力,对其他菌分泌的溶血素则无特异结合能力,用阻断ELISA检测LMO的检测时间和低检测菌数分别为增菌后5h和9.5×105个/mL.结论 研制了一株稳定分泌抗LLO单克隆抗体的杂交瘤细胞系,初步建立了阻断ELISA检测LMO的方法.
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食品中李斯特氏菌分离株的致病基因检测
1996-1997年我们对我省的七类食品共300份进行了李斯特氏菌的污染调查,用GB4789.30-94的方法共分离出李斯特氏菌6株,用PCR技术对分离菌株中李斯特氏菌的两种主要致病因子李氏溶血素O(Listeriolysin O,Hly)和内化素基因(Internalin,Inl)进行了检测,其中5株同时具有内化素基因和李氏溶血素O基因,1株上述两种基因均为阴性.
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2013-2014年北京市顺义区熟肉制品中单核细胞增生李斯特菌致病因子检测分析
目的 用PCR方法检测熟肉制品中单核细胞增生李斯特菌致病因子,为顺义区熟肉食制品中单增李斯特菌污染危害风险评估提供依据. 方法 利用细菌培养法从熟肉制品监测样本中分离单增李斯特菌,PCR检测阳性菌株的16-sRNA、侵袭蛋白P60、李氏溶血素、迟发型超敏反应蛋白等致病因子. 结果 180件食品样本共分离出6株单增李斯特菌;通过PCR检测致病因子,6株细菌都检出16sRNA和迟发型超敏反应蛋白的目的基因,5株检出李氏溶血素和侵袭蛋白目的基因,各引物检测目的基因的敏感性略有差异. 结论 顺义区熟肉制品中单核细胞增生李斯特菌污染较为严重,83.33％ (5/6)菌株携带李氏溶血素、侵袭蛋白P60等致病因子.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 致病因子 李氏溶血素 侵袭蛋白P60
