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VlsE蛋白文献资料
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中国B.afzelii基因型莱姆病螺旋体GDsh1表面蛋白VlsE保守区段的克隆表达及抗原性分析
目的 克隆表达中国莱姆病螺旋体B.afzelii基因型菌株GDsh1的表面蛋白VlsE保守区段,并对其抗原性进行分析,为制备中国莱姆病重组抗原ELISA检测试剂盒提供依据.方法 结合文献,下载并比对PubMed上所有莱姆病螺旋体B.a型菌株的VlsE基因序列,确定保守区段,设计引物,扩增GDsh1的VlsE基因片段.将扩增产物与载体PET-32a连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达.对重组载体进行序列测定,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析.利用重组VlsE蛋白制备ELISA试剂盒,检测83份莱姆病阳性血清,90份阴性血清以及90份梅毒血清,计算重组试剂盒的灵敏度和特异性.并与科室已有的全菌蛋白ELISA试剂盒检测结果进行比较.结果 成功克隆表达了B.afzelii型VlsE保守区蛋白,West-ern blot结果显示VlsE保守区蛋白与免疫兔血清有较强的抗原抗体反应.ELISA结果表明:重组VlsE蛋白的灵敏度60.2％低于全菌蛋白的灵敏度92.8％ (P＜0.001);特异性分别为73.3％、68.9％,差异无统计学意义(P=0.511).在检测梅毒血清上特异性分别为83.3％、18.9％,重组蛋白的特异性远远高于全菌蛋白(P＜0.00l).结论 重组VlsE基因保守区段蛋白在莱姆病的检测中具有一定的灵敏度和特异性,且在区分梅毒血清与莱姆病血清上,其特异性远远高于全菌蛋白,在莱姆病血清学检测中具有不容忽视的重要意义.
