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2011～2012年度中国H3N2亚型流感病毒病原学特征分析
为了解2011～2012年监测年度我国分离的H3N2亚型流感病毒流行和变异特点,本文对2011年4月至2012年3月流感监测年度中国大陆分离的H3N2亚型流感毒株进行了抗原性和基因特性研究.结果显示,2011年我国大陆H3N2亚型流感病毒活动水平较低,2012年1月以来活动水平逐渐升高并于3月初成为流行优势株.H3N2亚型流感病毒中大部分毒株与疫苗株A/PER/16 /09(87.2％)和国内代表株A/FJ/196/09(76.0％)抗原性类似,但2012年以来低反应株比例有升高趋势,基因特性分析大部分低反应株主要集中在Vic/208分支上,HA晶体结构分析发现与疫苗株相比,近期毒株在抗原决定簇A区、B区和C区均发生了氨基酸位点突变,而且在HA的45位,NA的367位各增加了一个糖基化位点.总之,虽然在此流感监测年度中我国大陆流行的大多数H3N2亚型流感病毒与疫苗株和国内代表株类似,但是随着低反应株的逐步流行,需要及时监测疫苗的保护效果并及时更换疫苗株.
关键词： H3N2亚型流感病毒 抗原性分析 基因特性分析 -
2011～2012年度中国B型流感病毒病原学特征分析
为了解本监测年度我国B型流感病毒的流行特点,明确流行株与国际疫苗株和国内代表株的匹配情况,本文对2011年4月至2012年3月流感监测年度中国大陆流感监测网络分离的B型流感毒株进行了抗原性和基因特性研究.结果表明2011年4月至2012年3月我国大陆B型流感病毒主要以Victoria系流感病毒为主,Victoria系病毒主要位于分支1,并且存在着HA1与NA基因分支间的重配,但不同分支间抗原性无显著差异,72.8％的病毒与本年度使用的疫苗株B/Brisbane/60/2008疫苗株抗原性类似.本监测年度疫苗组分中不含有Yamagata系组分,大部分Yamagata系流感病毒中与国内代表株B/湖北伍家岗/158/2009 (97.8％)和B/四川安岳/139/2011(85.2％)抗原性类似；基因特性分析显示绝大部分流行的B型Yamagata系流感病毒均与B/湖北伍家岗/158/2009和B/四川安岳/139/2011在同一分支,且没有发现HA1与NA基因分支间重配的病毒.上述监测结果表明本年度所使用的疫苗株与我国流行的病毒匹配,我们所筛选的国内代表株能够代表我国各地流行株的病原学特征.
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河北省流感病原学监测研究
目的为了解流感疫情,流行趋势和规律,以便采取有效防感措施.方法 1997-1998年流感流行期在保定市某定点医院采流感样病人咽拭子标本 55份,接种鸡胚和狗肾细胞 (MDCK),经血清学鉴定有 6株为 I亚型流感病毒.结果抗原性分析表明新毒株抗原性与国际代表株 A/北京 /262/95(H 1N 1)有人变异;与 A/冀防 /153/90()、 A/河北 /33/91(H 1N 1)有明显不同;与 A/京防 /1/86(H 1N 1)、 A/石铁 /4/87有小变异. 1998年 4月采集流行后的健康人群血清共 159份,对新分离株的抗体阳性率平均为 47.80% ,15～ 24岁年龄组感染率高. GMT为 46.94,波动在 37.12～ 64.00之间,以 0～ 5岁组高.结论本流行期 H 1N 1亚型毒株为优势株, H 1N 1亚型毒株在人群中有一定传播.
关键词： 流感 H 1N 1亚型毒株 抗原性分析 -
拟态弧菌重组蛋白OmpUa的表达条件优化及其抗原性分析
目的 分析重组蛋白OmpUa的表达形式和抗原性,优化拟态弧菌OmpUa基因工程重组菌( pMALc4X-OmpUa/TB1)的表达条件.方法 诱导基因重组工程菌表达,分别采用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白OmpUa的表达形式及其抗原性.采用正交试验设计L9(34)方案,通过SDS-PAGE和电泳图谱光密度扫描分析培养基种类、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度等因素对重组蛋白表达的影响.结果 重组蛋白OmpUa主要以可溶性形式表达,具有良好的抗原性.基因工程重组菌接种LB培养基,37℃振荡培养3h时加入0.5 mmol/LIPTG诱导4h,即可获得高表达量的重组OmpUa蛋白.结论 摸索出拟态弧菌OmpUa基因工程重组菌的佳表达条件,为下一步大量制备OmpUa诊断性抗原奠定了基础.
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人腺病毒六邻体蛋白保守区抗原性分析
目的 阐明人腺病毒(HAdV)六邻体蛋白保守区的抗原性的特征,为鉴定六邻体的抗原表位奠定基础.方法 用生物信息学软件ANTHEPROT 5.0和DNAMAN对HAdV3六邻体氨基酸序列进行抗原性预测分析和二级结构的分析,然后由SWISS-MODEL Protein Modelling Server预测出HAdV3六邻体蛋白三维结构.结果 抗原性预测分析显示,在六邻体的前段和中段,该区域含有大量的保守区,可能具有较强的抗原性,而六邻体后段总体抗原性较弱.根据HAdV2六邻体蛋白三维结构模型预测出HAdV3六邻体蛋白三维结构.结论 六邻体的前段和中段的部分保守区域在腺病毒颗粒上可能具有较好的暴露性并可能含有抗原性较强的型间或组特异性抗原表位.
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猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析
目的 鉴定、表达猪带绦虫(Taenia solium)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Tsserpin B6),探索其作为诊断抗原的可行性. 方法 利用猪带绦虫基因组和转录组数据设计Ts serpin B6特异引物,RT-PCR扩增获得Tsserpin B6基因,对其DNA、氨基酸序列进行生物信息学分析,利用Clustal X1.83进行序列比对,并用MEGA6.0进行系统进化分析.构建pET-30a-Tsserpin B6重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)中诱导表达.纯化表达的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用猪囊尾蚴阳性血清进行蛋白质印迹(Western blotting)鉴定. 结果 Tsserpin B6开放阅读框为1 131 bp,编码376个氨基酸.其编码的氨基酸序列具有serpin较为保守的反应中心环和特征性结构域(NEEGAE和FTVDHPFLF),存在9个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位.Ts serpin B6的表达产物相对分子质量(Mr)为53 000,主要以包涵体形式存在.Western blotting检测结果显示,所表达的蛋白可与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应,在Mr 53 000处产生特异条带. 结论 克隆了Tsserpin B6基因,其表达产物能被猪囊尾蚴阳性血清所识别.
关键词： 猪带绦虫 Tsserpin B6 鉴定 表达 抗原性分析 -
日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原的融合表达及抗原性分析
目的重组表达制备日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原(SjMP10).方法根据日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原SjMP10分子的读框序列设计合成1对引物,扩增SjMP10 DNA片段并克隆到表达载体pGEX-4T-3中.转化BL21(DE3)后,诱导表达谷胱甘肽转移酶-虫卵中毛蚴抗原10(GST-SjMP10)融合蛋白.采用洗脱法制备GST-SjMP10融合蛋白,应用免疫印迹法(Western blotting)和淋巴细胞增殖试验进行重组蛋白的抗原性分析.结果SjMP10基因克隆到表达质粒pGEX-4T-3后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导能表达出Mr 39000的GST-SjMP10融合蛋白,经电洗脱法纯化的上述重组融合蛋白可被血吸虫感染兔血清所识别,并能刺激血吸虫感染鼠脾淋巴细胞增殖.结论日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原SjMP10融合表达获得成功.
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福建省2株麻疹病毒的分离与鉴定
[目的]了解福建省目前流行的麻疹野病毒的型别与抗原性.[方法]细胞培养分离病毒;PT-PCR扩增病毒N基因碳末端450个核苷酸,并对其产物测定基因序列以定型;细胞中和试验进行抗原性分析.[结果]B95a细胞分离到了2株麻疹野病毒,Vero细胞未分离到,表明B95a细胞敏感性较高;分离到的病毒经PT-PCR及基因序列测定证实为麻疹野病毒H1基因型(中国流行的优势株);分离的野病毒株与疫苗株同时进行血清中和试验显示:目前使用的疫苗产生的抗体对流行的野病毒仍具有中和作用,但中和滴度低于疫苗株.[结论]在保证生物安全的前提下,B95a细胞是目前分离麻疹病毒的首选细胞;新变异来的麻疹H1基因型也在我省流行,且目前使用的疫苗所产生的抗体,在体外中和野毒株的滴度低于疫苗株.
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弓形虫GJS株表面抗原1基因的原核细胞表达及其抗原性分析
目的 构建弓形虫 GJS 株表面抗原 1(SAG1) 重组表达质粒,研究 SAG1 蛋白疫苗诱导的保护性免疫作用.方法 根据 RH 株弓形虫 SAG1 基因序列设计 1 对引物,利用 PCR 方法 获得 SAG1 基因,克隆入 pMD18-T 载体,测序后进行序列分析;重新设计引物将其亚克隆至原核表达载体 pET-30a 中,在大肠杆菌中经 IPTG 诱导表达;重组抗原经纯化和复性后免疫小鼠,ELISA 法测定其抗体滴度的变化,并用弓形虫速殖子攻击检测免疫保护力.结果 与已知的 SAG1 基因核苷酸序列 (S76248) 及其编码氨基酸序列的同源性分别为 99%、97%;表达的 SAG1蛋白以包涵体形式存在,该重组抗原能被羊抗弓形虫阳性血清所识别;经间接 ELISA 检测,小鼠免疫后产生了较高的抗体;动物保护性实验表明,虽然与对照组相比免疫组小鼠存活时间有一定的延长,但差异无显著性.结论 成功构建了弓形虫SAG1重组表达质粒,SAG1 蛋白疫苗诱导小鼠的免疫保护力不强.
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中国B.afzelii基因型莱姆病螺旋体GDsh1表面蛋白VlsE保守区段的克隆表达及抗原性分析
目的 克隆表达中国莱姆病螺旋体B.afzelii基因型菌株GDsh1的表面蛋白VlsE保守区段,并对其抗原性进行分析,为制备中国莱姆病重组抗原ELISA检测试剂盒提供依据.方法 结合文献,下载并比对PubMed上所有莱姆病螺旋体B.a型菌株的VlsE基因序列,确定保守区段,设计引物,扩增GDsh1的VlsE基因片段.将扩增产物与载体PET-32a连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达.对重组载体进行序列测定,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析.利用重组VlsE蛋白制备ELISA试剂盒,检测83份莱姆病阳性血清,90份阴性血清以及90份梅毒血清,计算重组试剂盒的灵敏度和特异性.并与科室已有的全菌蛋白ELISA试剂盒检测结果进行比较.结果 成功克隆表达了B.afzelii型VlsE保守区蛋白,West-ern blot结果显示VlsE保守区蛋白与免疫兔血清有较强的抗原抗体反应.ELISA结果表明:重组VlsE蛋白的灵敏度60.2％低于全菌蛋白的灵敏度92.8％ (P＜0.001);特异性分别为73.3％、68.9％,差异无统计学意义(P=0.511).在检测梅毒血清上特异性分别为83.3％、18.9％,重组蛋白的特异性远远高于全菌蛋白(P＜0.00l).结论 重组VlsE基因保守区段蛋白在莱姆病的检测中具有一定的灵敏度和特异性,且在区分梅毒血清与莱姆病血清上,其特异性远远高于全菌蛋白,在莱姆病血清学检测中具有不容忽视的重要意义.
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弓形虫速殖子表膜蛋白的组分和抗原性分析
目的试验分析弓形虫速殖子表膜蛋白的组分及其抗原性.方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析弓形虫速殖子表膜蛋白的组分和用弓形虫病人阳性血清及兔抗弓形虫表膜抗原血清识别硝酸纤维膜载体上的速殖子表膜抗原的免疫反应靶位.结果弓形虫速殖子表膜抗原的独特蛋白区带分子为16和17kDa,弓形虫病人特异性抗血清识别的速殖子表膜抗原的免疫反应位点为16kDa,免抗血清识别出64,35,32,26,16kDa等8个位点.结论弓形虫速殖子表膜蛋白存在特异的抗原决定簇和可被特异性抗体识别的受体,证明速殖子表膜蛋白具有较好的抗原性,此对于弓形虫病的免疫学诊断具有重要的意义.
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湖北省2007~2012年 H3N2流感病毒 HA基因及抗原性分析
目的：研究湖北省2007~2012年 H3N2流感病毒 HA 基因变异及抗原性变化情况。方法选取2007~2012年分离的湖北省各地区 H3N2流感病毒39株,提取病毒 RNA,运用 RT-PCR技术扩增 HA基因并测定序列,软件导出其核苷酸、氨基酸序列,采用 MEGA5.2构建进化树,用红细胞凝集抑制实验检测病毒的抗原性。结果14株毒株红细胞凝集抑制结果显示效价与参照抗原有4倍以上的差异,提示 H3N2流感病毒存在抗原性变异；核苷酸有较高的同源性,为97%~99%；HA1区共有50个氨基酸发生改变,其中37个在抗原位点,受体结合位点有2个(194、225位),抗原决定簇 A区4个,B区6个,C区2个,D、E区各1个；糖基化位点有明显的地域差异,不同地区糖基化位点的数量和位置均不相同。结论湖北省2007~2012年间 H3N2流感病毒抗原性和 HA基因存在变异。
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用抗合成多肽抗体分析呼吸道HAdV六邻体保守区抗原表位
目的分析人类腺病毒(HAdV)六邻体保守区氨基酸序列, 合成保守区多肽并制备抗多肽抗体, 以确定型间共同的特异性表位.方法用ClustalX、Antheprot等软件, 对HAdV六邻体进行分析, 确定保守区并分析其抗原性.合成抗原性多肽, 免疫家兔制备抗肽多克隆抗体.用间接免疫荧光法和Western blot法, 检测所制备的抗肽抗体与病毒抗原的反应性.结果根据HAdV-2六邻体的保守区合成9种肽段, 分成3组免疫家兔, 共获得3组抗肽抗体.所有的抗肽抗体在1∶ 1 000稀释度时, 与3个型别的HAdV感染细胞裂解物中相对分子质量(Mr)约为116 000的六邻体亚单位具有特异性反应.抗肽抗体对HAdV感染细胞有特征性荧光染色.3组抗肽抗体中, 有7个抗体与3个型别的HAdV感染细胞均具有阳性染色反应. 结论合成的保守区多肽能够诱导抗肽抗体产生, 诱导产生的抗体与HAdV-3、-4、-7具有免疫反应性.通过分析预测抗原表位并制备抗肽抗体是可行的.
