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2011-2014年青岛地区甲型H3N2流感病毒基因进化分析
目的 了解2011-2014年青岛地区人群甲型H3N2流感病毒流行株基因进化及抗原变异趋势.方法 选取2011-2014年间青岛地区流行的甲型H3N2流感病毒64株,提取病毒RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HA、NA、MP 3个基因片段,并进行序列测定,对各基因片段进行系统发育分析及基因和氨基酸位点变异分析.结果 HA进化树分析表明,甲型H3N2流感病毒基本上分为三大分支,并且每个分支与当年的疫苗株都不在同一分支上;HA1蛋白抗原决定簇共有8个位点发生了变化;NA蛋白酶活性中心及周围相关位点氨基酸组成保守,未检测到耐奥司他韦和扎那米韦的变异位点.M2蛋白均发生S31N突变.结论 2011-2014年青岛地区流行的H3N2流感病毒在持续不断地发生基因变异而产生抗原漂移;毒株全部为烷胺类药物耐药株,但对神经氨酸酶抑制剂敏感.
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浙江省1998年H3N2流感流行的溯源研究
目的 对1998年浙江省的H3N2流感流行进行溯源研究.方法 采用RT-PCR扩增浙江省1998年3株H3N2流感流行代表株的全基因组序列,并与GenBank上1995-1998年世界其他地区H3N2流感流行株进行比较;同时,采用交叉血凝抑制实验,计算各毒株间的抗原比.结果 HA基因进化树表明,1998年浙江省H3N2优势流行株A/Zhejiang/11/98、A/Zhejiang/18/98与1995-1996年世界各地以及1997年我国大陆的H3N2流行株间存在显著差异,在进化树上虽与A/Sydney/5/97同属一簇,但和美国纽约以及中国香港1997年后期流行株更为接近.在HA1、NA和MP基因上,A/Zhejiang/18/98与香港1997年后期流行株同源性高,而在PA、HA和NS基因上,与纽约流行株的遗传距离也小于A/Sydney/5/97.A/Zhejiang/18/98与香港或纽约株在HA1区仅存在1～3个位点的氨基酸残基不同,而与A/Sydney/5/97存在7个位点的氨基酸残基差异,其中3个位点于抗原决定簇区.各毒株间的交叉血凝抑制实验表明A/Zhejiang/18/98与A/Sydney/5/97的抗原比已达2.0,提示二者在抗原性上存在一定差异.此外,1997-1998年H3N2各地流感流行的起始时间序列,也显示了该次流感传播的可能途径.结论 浙江省1998年H3N2流感的流行很可能是由1997年底H3N2新型流感变异株经纽约和香港输入中国大陆所导致.
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2012-2015年上海地区成人甲型H3N2流感病毒抗原漂变分析
目的 通过分析2012-2015上海地区成年人甲型H3N2流感病毒的分子流行病学及HA抗原漂变情况,从而了解甲型H3N2流感病毒分子流行及变异变迁规律.方法 采集2012-2015年间上海地区三家哨点医院流感样成人病例的呼吸道标本,收集临床资料.提取标本核酸后用实时荧光PCR检测流感病毒,对甲型流感病毒阳性的标本进一步进行基因分型.对H3N2阳性标本扩增血凝素(HA)基因片段、测序和进行基因变异分析.结果 总共收集2 346例病例,甲型流感病毒核酸检测阳性病例331例,其中273例为H3 N2流感病毒阳性,58例为2009 pdmH1N1流感病毒阳性.2012年-2015年期间,上海地区H3N2流感病毒在每年的冬春季流行,但在2014年和2015年均呈现夏季流行高峰.对2012年-2015年间获得的上海地区180个H3N2流感病毒的HA基因全长序列进行系统进化树分析发现:2012-2015年间H3N2流感病毒总共引起了3个主要的流感流行峰,分别是2013年12月-2014年1月、2014年7-8月和2015年7-8月,且分别属于三个不同的基因簇:A/Finland/385/2013类似株,为group 3C.3b;A/Switzerland/9715293/2013类似株(SW13),为group 3C.3a和A/Hong Kong/5783/2014类似株(HK14),group 3C.2a分支.比较3个流行峰的甲型H3 N2流感病毒,发现血凝素蛋白氨基酸序列存在一定差异,主要分布于抗原表位和受体结合位点(RBS).结论 2012-2015年间,上海地区流行的H3N2流感病毒出现明显的2次抗原漂变,可能是导致上海地区近年来H3N2流感流行的原因.
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H3N2流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达及其对293T细胞增殖的影响
目的:构建甲型H3N2流感病毒非结构蛋白-1( nonstructal-1,NS1)真核表达载体并表达其编码蛋白；探讨NS1对细胞增殖的影响.方法:从江苏省甲型H3N2流感病毒毒株提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Simple Vector中构建pMD 18-T/NS1质粒,双酶切pMD18-T/NS1与pXJ40-HA后,构建真核表达载体pXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过免疫印迹法鉴定NS1蛋白的表达.3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-yl)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测NS1转染细胞后对细胞增殖的影响.结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功；免疫印迹法证实NS1蛋白的表达.MTT法证实转染NS1质粒后对细胞增殖有抑制作用.结论:成功克隆了NS1全长基因,构建了其真核表达载体,并初步验证了NS1蛋白过表达后能抑制细胞的增殖,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1的细胞模型和NS1蛋白对细胞增殖和凋亡作用机制的进一步研究提供了基础.
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小学生流行性感冒暴发的调查
[目的]调查漏水坪小学学生以发热、咳嗽、头痛、咽痛为主要症状的群体性发病的原因.[方法]对病例进行流行病学分析;采集患者咽拭子进行流感病毒分离,采集双份血清检测流感抗体.[结果]全校289名师生,罹患率为27.68%;从39份咽拭子中分离出11株A型流感病毒(H3N2),35份双份血清中28份流感抗体滴度呈4倍升高.[结论]这是一起H3N2型流感暴发.
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岭南地区221例H3N2流感病毒感染患者的临床特征分析
目的 探讨岭南地区H3N2流感病毒感染患者的临床特点.方法 对221例H3N2流感病毒感染患者的临床特征进行回顾,采用描述性统计方法对其发病特征进行分析.结果 221例甲型H3N2流感病毒感染以21岁～30岁的青壮年人群为主,发病季节高峰在夏季(6月-8月)为多,均以发热为主,流感样症状较明显,阳性体征以不同程度的咽部充血及扁桃体肿大为主,血常规检查白细胞多数在正常范围.结论 岭南地区H3N2流感病毒感染表现出普通流行性感冒的症状和特点,应加强病原学检测及监测,规范抗病毒治疗.
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湖北省2007~2012年 H3N2流感病毒 HA基因及抗原性分析
目的：研究湖北省2007~2012年 H3N2流感病毒 HA 基因变异及抗原性变化情况。方法选取2007~2012年分离的湖北省各地区 H3N2流感病毒39株,提取病毒 RNA,运用 RT-PCR技术扩增 HA基因并测定序列,软件导出其核苷酸、氨基酸序列,采用 MEGA5.2构建进化树,用红细胞凝集抑制实验检测病毒的抗原性。结果14株毒株红细胞凝集抑制结果显示效价与参照抗原有4倍以上的差异,提示 H3N2流感病毒存在抗原性变异；核苷酸有较高的同源性,为97%~99%；HA1区共有50个氨基酸发生改变,其中37个在抗原位点,受体结合位点有2个(194、225位),抗原决定簇 A区4个,B区6个,C区2个,D、E区各1个；糖基化位点有明显的地域差异,不同地区糖基化位点的数量和位置均不相同。结论湖北省2007~2012年间 H3N2流感病毒抗原性和 HA基因存在变异。
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2014-2015年度淮安市甲型H3N2流感病毒的流行及血凝素基因特征分析
目的 了解淮安地区甲型H3N2流感病毒的流行特征和基因型别.方法 收集2014年4月-2015年3月间2家哨点医院采集的流感样病例咽拭子,利用实时荧光RT-PCR方法进行流感病毒的快速检测,对流感病毒核酸阳性的样本进行流感病毒HA基因扩增、测序.利用Lasergene软件进行序列比对及核苷酸同源性分析,并分析血凝素主要的抗原位点,利用Mega6.0软件构建系统进化树,对该时间段内的H3N2病毒流行情况进行统计分析.结果 H3N2亚型流感病毒淮安株的核苷酸同源性为98.9％～ 99.9％,所收集的淮安株均为H3N2亚型的3C.3a系,在进化关系上与广西株A/Guangxi-Longan/1100/2015和淮安株A/Jiangsu-Qingpu/1660/2015关系较近,H3N2流行主要发生在秋冬季节.结论 与疫苗株相比,淮安地区H3N2病毒发生变异,提示疫苗株免疫效果下降.
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无锡地区H3N2流感病毒流行情况实验室分析
目的 了解无锡地区H3N2流感病毒血凝素基因变异情况和人群中HI抗体水平,分析H3N2流感病毒流行情况.方法 选取2007～2010年哨点医院的H3N2流感病毒进行基因序列比对；选择2008年9月～2009年5月健康体检人群及流感监测哨点医院就诊病例血清140份,2010年9月～2011年1月血清98份进行人群中HI抗体分析.结果 对无锡地区分离的42株H3N2流感病毒的HA基因进行分析,核苷酸序列同源性为98.1％～99.6％,病毒之间的核苷酸序列同源性差异较小.2008年9月～2009年5月人群中H3N2 H1抗体阳性率为86.40％、保护率为84.30％、GMT为1∶58.56,2010年9月～2011年1月人群中为100.00％、100.00％、1∶78.88,两者之间HI抗体阳性率、保护率和GMT差异有统计学意义(P均=0.000).结论 根据对无锡地区2007 ～2011年H3N2亚型流感病毒监测、基因进化分析和人群中抗体保护检测情况分析,推测近期H3N2流感病毒不会有较大流行.
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2009年成都市流感活动情况及H3N2亚型流感病毒HA1基因特性分析
目的 分析2009年成都市流感流行情况,探讨甲3流感病毒(H3N2)亚型分离毒株的流行及HA1基因变异和进化.方法 MDCK细胞对咽拭子样品进行病毒分离鉴定,提取病毒核酸,用RT-PCR法扩增HA1基因,对H3N2分离株核酸及氨基酸序列进行亲缘关系分析.结果 甲型流感H1N1、H3N2、甲1、B型流感病毒分离率分别为25.2%、7.2%、4.5%、1.5%,流感流行高峰为夏秋季.H3N2与同年疫苗株氨基酸序列比对,同源性为97.0%～98.8%,点突变率为1.8%～3.0%,在抗原决定簇及受体结合部位共有4个位点发生替换:160位N＞K、174位K＞R/N、189位K＞Q、277位R＞Q.部分毒株在160位插入糖基化位点,在181位出现糖基化位点缺失.结论 2009年成都市流感以甲型流感H1N1为主,甲1、甲3及B型流感病毒循环交替并存;H3N2基因特性发生改变,出现抗原漂移.
