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2011～2013年福建省手足口病相关病原柯萨奇病毒A组6型的分子流行病学研究
为揭示2011～2013年福建省手足口病相关病原其它肠道病毒中优势血清型柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CVA6)的分子流行病学特征,我们收集2011～2013年福建省确诊为其它肠道病毒个人的1340例手足口病的病例标本,进行病毒培养和鉴定分型,对其中优势血清型CVA6进行完整VP1区基因片段的扩增测序和分析.共分型鉴定出其它肠道病毒病例375例,其中CVA6病例182例(占48.5％).CVA6病例在2011～2013年福建省手足口病病原谱的年度构成比分别为7.9％、16.2％和39.6％.与手足口病总体疫情相比,CVA6病例在地区、性别、年龄组分布没有特异性,致重症率较低.VP1区基因序列分析显示,CVA6福建分离株与原型株的核苷酸序列差异较大(16.2％～18.6％),氨基酸序列差异为4.3％～6.2％.进化分析显示,CVA6福建分离株与原型株及国外地区分离株的亲缘关系远,与国内地区分离株的亲缘关系近.CVA6福建分离株在进化树的分布呈多个分支.结果表明,2011～2013年福建省手足口病病原谱发生较大变化,CVA6成为手足口病主要的病原之一.CVA6福建分离株与国内地区相应分离株共进化共循环,在福建至各个地区呈多条亲缘关系接近传播链同时流行.
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安阳地区2013年手足口病柯萨奇病毒A6 VP1基因特征研究
为了解2013年安阳地区手足口病病原谱组成特点及柯萨奇病毒A6 (CV-A6) VP1基因特征,采用实时荧光逆转录PCR方法对全年采集的临床手足口病例的479份粪便标本进行检测和分型,统计各型肠道病毒阳性标本数量及比例.对10份CV-A6阳性标本VP1基因进行扩增测序以获得全序列.使用BIOEDIT 7.2和MEGA 5.1软件对获得序列和NCBI数据库中检索到的参考序列进行VP1基因核苷酸、氨基酸相似性及系统发育分析.研究结果显示,检出肠道病毒阳性标本共429份,其中CV-A6阳性标本为90份,占全部阳性标本的比例为20.98％,这是安阳地区首次记录非CV-A16和EV-A71型肠道病毒列居手足口病病原谱第二位,成为手足口病主要病原之一.将成功获得的10条VP1序列与CV-A6原型株Gdula比较,发现安阳序列与Gdula VP1基因的核苷酸、氨基酸序列差异皆较大.与河南历史株HN421(2011)比较,发现有4条本地序列与HN421的核苷酸、氨基酸序列差异较大,其余6条与HN421差异较小.系统发育树显示,全部49条CV-A6序列共形成A、B、C、D四个分支.其中D分支可进一步分为D1和D2两个亚分支.安阳地区获得的10条CV-A6序列中,有6条属于D1亚分支,4条属于D2亚分支.
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2012～2016年新疆柯萨奇病毒A6的分子流行病学特征分析
分析新疆手足口病相关的柯萨奇病毒A6 (Coxsackievirus A6,CV-A6)毒株VP1区基因特征.2012～2016年从新疆手足口病病例标本中分离到75株CV-A6,对75株CV-A6采用RT-PCR方法扩增VP1区基因片段并进行核苷酸序列测定,应用MEGA5.05和BioEdit7.1.9软件进行核苷酸序列比对分析,构建系统进化树.75株新疆CV-A6毒株VP1区核苷酸序列同源性为86.9％～100％,与原型株(Gdula)同源性为81.4％～82.5％;71株D3亚型株与D3代表株之间核苷酸序列同源性为93.1％～99.6％;4株D2亚型株与D2代表株之间核苷酸序列同源性为92.6％～96.5％.进化树图分析显示,新疆CV-A6毒株均属于D基因型,其中绝大多数(71/75)处于D3分支,属于D3亚型,2012～2016年具有分布;少数(4/75)处于D2分支,属于D2亚型,只分离于2013～2014年.新疆CV-A6在系统进化树上形成多个不同的小分支,不同年份不同地区的CV-A6毒株分别与国内一些地区的毒株有着较近的亲缘关系,说明新疆CV-A6毒株的传播链和基因型分布与内地CV-A6相同,与内地的CV-A6共进化的.加强手足口病的病原学监测及相关病原的分子特征研究对手足口病的防控至关重要.
关键词： 手足口病(HFMD) 柯萨奇病毒A6 新疆维吾尔自治区 -
柯萨奇病毒A6 TaqMan探针实时荧光逆转录PCR检测方法的建立
目的 设计柯萨奇病毒A6特异性TaqMan探针和引物,建立敏感、特异的实时荧光逆转录PCR检测方法.方法 针对CVA6 VP1基因,设计荧光探针和引物,优化摩尔配比,建立并优化PCR反应体系.回收PCR产物,构建重组质粒,经梯度稀释后作为模板进行敏感性试验,绘制标准曲线,评估检测方法的敏感性.对包括多种肠道病毒在内的共15种病毒进行特异性实验,评估检测方法特异性.对479份手足口病患者临床标本进行鉴定,检出的CVA6阳性标本再用普通PCR方法复核.随机抽取10份实时荧光PCR阳性产物克隆后测序,评估本方法检测临床标本的准确性.结果 建立的实时荧光逆转录检测方法扩增出CVA6 VP1基因的目的序列,当探针、引物摩尔配比在1:2～1:5时,PCR结果均较为理想,探针、引物摩尔配比为1:3.5时,荧光强度大.敏感性试验显示该方法扩增效率为88.9％,可检出低至2.1×102copies/ml核酸模板.特异性试验显示该方法仅能对CVA6实现特异性扩增,其他多种病毒反应均为阴性.从479份手足口临床标本中共检出CVA6阳性标本84份,与普通PCR方法复核结果一致.随机抽取的10份阳性产物克隆测序鉴定后均为CVA6目的序列.结论 建立的实时荧光逆转录PCR方法具有特异性强、灵敏度高、准确可靠等优点,可用于CVA6型手足口病检测.
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2015-2016年贵州省柯萨奇病毒A6型分离株的基因特征分析
目的 分析贵州省柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)分离株的基因特征. 方法 2015-2016年分离自贵州省急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)患者的5株CVA6,采用RT-PCR进行VP1区基因扩增并测序,通过MEGA7.0软件采用邻位相接法(neighbor joining method)构建遗传进化树,分析VP1区基因特征,通过1000bootstrap值评估其可靠性. 结果 5株CVA6贵州分离株之间的的核苷酸与氨基酸同源性分别为94.2％～100％和97.3％～100％,与原型株Gdula株之间的核苷酸同源性与氨基酸分别为81.8％～83.1％,和94.5％～95.7％;5株CVA6均为F基因型,其中1株(MF45512)为F2基因亚型,另外4株为F3基因亚型. 结论 2015-2016年贵州省CVA6流行株为F2和F3基因亚型,以F3基因亚型为主.
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柯萨奇病毒A6致手足口病研究进展
近年来由柯萨奇病毒A6（CVA6）导致的手足口病在欧洲、北美和亚洲多个国家暴发流行，已快速上升为手足口病的主要致病原。临床症状显示，CVA6导致的手足口病患者表现为多部位的出疹甚至脱甲，成人感染和重症病例也有较多报道。分子流行病学显示，近年来流行的 CVA6为新型变异株与其他型别的肠道病毒存在重组，可能是导致临床症状改变的潜在原因。
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不典型手足口病患儿122例临床特点分析
目的 分析儿童不典型手足口病的临床特点.方法 收集并分析2013-06/09在大连市儿童医院确诊为不典型手足口病患儿122例的临床资料.结果 122例不典型手足口病患儿发病高峰为8月份,斑丘疹或疱疹分布于耳部、口周、躯干及四肢分别为62％(76/122)、69％(84/122)、66％(81/122)及100％(122/122).口腔以外黏膜受累21％(26/122),中枢神经系统感染占19％(23/122),无危重症病例发生.肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)、柯萨奇病毒A组10型(CA10)及柯萨奇病毒A组6型(CA6)感染分别为1％(1/91)、1％(1/91)、0(0/93)及84％(78/93).病后1周至2个月指趾甲缺失占45％(44/97).结论 不典型手足口病主要病原为CA6,发病高峰在8月份.皮肤、黏膜广泛受累,也可累及中枢神经系统,恢复期可出现指趾甲缺失,预后好.
关键词： 不典型手足口病/诊断 柯萨奇病毒A6 儿童 -
柯萨奇病毒 A6型手足口病所致全身性疱疹并累及颈髓1例
手足口病是一种常见的由肠道病毒引起的急性传染病，其病原体主要是人肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16（CVA16），而CVA6感染所致手足口病相对少见。现报道1例由CVA6型手足口病致全身性疱疹并累及颈髓的病例。一般手足口病皮疹多发于手足心、臀部、膝关节和肘关节，而该患儿发病后短期内发展为全身性疱疹，并伴有神经元烯醇化酶（NSE）显著增高和颈髓磁共振成像（MRI）影像学改变。经过抗炎、抗病毒、抗感染及支持疗法等治疗后，患儿皮疹消退，痊愈出院。C V A6型手足口病所致全身性疱疹并发颈髓损害较为罕见，需引起临床工作者的高度重视。
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2014年温州地区柯萨奇病毒A组6型手足口病的临床特征及分子流行病学特征分析
目的对柯萨奇病毒A组6型（CoxA6）手足口病进行临床特点及分子流行病学特征研究，以阐明此次疫情的特点。方法收集温州医科大学附属第二医院儿童感染科2014年7月至11月间临床确诊手足口病患者949例。所有患者均行肛拭子和（或）咽拭子检测，对病毒检测阳性的患者分为CoxA6组与非CoxA6组进行流行病学及临床特点分析，并于4周内进行门诊和（或）电话随访收集皮疹脱屑、指甲异常的情况。病毒检测CoxA6阳性者，通过反转录‐PCR对CoxA6的VP1序列进行扩增、克隆和测序；通过Mega 6．0软件对不同病毒株VP1序列进行系统发生分析。两组间计量资料比较采用 t检验，计数资料比较采用χ2检验或 Fisher 精确概率法。结果终实验室确诊560例，其中CoxA6446例（79．6％），人肠道病毒71型（EV71）44例（7．9％），CoxA1043例（7．7％），CoxA1627例（4．8％）。CoxA6组体温＞39℃患儿比例显著高于非 CoxA6组（71．3％比52．6％，χ2＝14．42，P＜0．01），但持续时间短于非CoxA6组[（2．4±1．2） d比（3．1±1．4） d ，t＝－4．45，P＜0．01）；CoxA6组脑炎或脑膜炎神经系统受累方面显著低于CoxA6组，差异有统计学意义（0．7％比19．3％，χ2＝81．53，P＜0．05）。CoxA6组口腔及口周皮疹（31．6％比13．2％，χ2＝15．39）、小腿及前臂皮疹（32．3％比16．7％，χ2＝10．74）、颈部及躯干皮疹（34．5％比8．8％，χ2＝29．09）、皮疹溃疡及结痂（29．8％比18．4％，χ2＝5．92），均显著高于非CoxA6组，且差异均有统计学意义（均 P＜0．05）；而非CoxA6组皮疹主要局限于手掌及足底，与CoxA6组差异有统计学意义（93．9％比21．7％，χ2＝1．94，P＜0．01）。CoxA6组疱疹（61．2％比28．9％，χ2＝38．13）、大疱疹（23．3％比5．3％，χ2＝18．75）比例均高于非CoxA6组（均 P＜0．01）。出院4周内进行门诊和（或）电话随访，CoxA6组皮疹愈合后出现脱皮（30．0％比14．9％，χ2＝10．56）、脱甲（20．4％比9．6％，χ2＝7．05）比例显著高于非 CoxA6组，差异均有统计学意义（均 P＜0．05）。序列分析表明CoxA6株与来自我国部分流行株的同源性较高（94．2％～99．2％），且在同一个分支。结论 CoxA6感染主要表现为皮肤、黏膜多处受累，较深的皮肤组织被破坏，并出现脱皮和指甲异常，无明显中枢神经系统受累，预后好。
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伴有面部皮疹的手足口病临床特征及病原学研究
目的 分析伴有面部皮疹的不典型手足口病的临床特征及病原.方法 回顾分析2016年1月至12月手足口病患儿的临床资料,以及部分患儿的病原学检测结果;按有无面部皮疹,将患儿分为两组进行比较.结果 共纳入11430例手足口病患儿,其中伴有面部皮疹的不典型手足口病患儿1134例,占9.92％.伴面部皮疹的不典型手足口病以<1岁及≥3岁儿童多见,临床症状较轻,发热及神经系统并发症发生率均低于无面部皮疹组;病原以柯萨奇病毒A6为主,其比例明显高于无面部皮疹者;差异均有统计学意义(P<0.05).结论 伴有面部皮疹的不典型手足口病以柯萨奇病毒A6感染为主,临床症状轻且不典型.
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南昌地区儿童手足口病病原型别及其流行特征分析
目的 了解南昌地区儿童手足口病(HFMD)的病原学构成,为该地区HFMD的流行病学防控提供基础.方法 收集2014年4至12月临床送检疑似HFMD患者咽拭子标本,运用荧光定量RT-PCR检测肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CVA16)核酸;每季度按照等距抽样的方法选取一定量的非EV71、非CVA16型的其他EV标本,利用VP4区分型引物进行巢式PCR,产物通过测序和GenBank Blast比对进行分型鉴定.结果 2014年4至12月共检测到EV阳性病例19 059例,其中EV71、CVA16和其他EV检出率分别为23.22％ (4 425/19 059)、11.36％ (2 166/19 059)、65.42％(12 468/19 059).其他EV抽样检测结果显示,第2季度CVA10占比高,为24.39％(10/41),其次是CVA4和CVA6,各占19.51％ (8/41);第3季度CVA6占比高,为73.08％ (95/130),其次是CVA10和CVA4,分别占11.54％(15/130)和6.15％ (8/130);而第4季度CVA6占比94.74％ (36/38),其次是CVA10占5.26％ (2/38).结论 2014年第2至第4季度非EV71、非CVA16型的其他EV检出率高,且CVA6为2014年第3和第4季度南昌地区引起HFMD的优势病毒株.
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柯萨奇病毒A6所致手足口病研究现况
近年来,由柯萨奇病毒A6(coxsackievirusA6,CoxA6)引起的手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)在全球多个国家以及我国多个地区暴发流行,已逐渐为引起HFMD的主要病原之一.CoxA6不仅能感染3岁以下的儿童,也可对成年人造成严重伤害.脱甲是CoxA6感染所致HFMD的常见临床表现,其严重病例多出现神经系统症状,并发无菌性脑膜炎、脑炎.此外,CoxA6感染导致皮肤损害的程度更为严重.由于目前针对CoxA6的研究尚不全面,尤其是关于CoxA6致病机理及动物模型的研究资料较少,因此,对CoxA6的相关研究进行总结和归纳,为今后CoxA6所致HFMD的防治奠定基础,为CoxA6预防疫苗的研发提供新思路.现就CoxA6目前的流行概况、病毒感染、临床症状、疫苗研发等作一综述.
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2014～2015年龙岩市手足口病流行病学及病原学特征分析
目的 对龙岩市2014～2015年HFMD流行病学和病原学特征进行分析,为防控提供依据.方法 运用描述流行病学方法对龙岩市2014～2015年HFMD资料进行分析.采用实时荧光RT-PCR法对龙岩市HFMD监测标本进行肠道病毒核酸检测.结果2014～2015年共报告HFMD病例17 436例,5岁以下病例占94.24％,男性(61.95％)多于女性(38.05％).男性年均发病率为404.27/10万,女性为266.82/10万,男女发病率差异有统计学意义(P＜0.01).发病呈双高峰分布,分别在3～5月(发病6 497例,占总病例数的37.26％)和9～11月(发病数为6 091例,占总病例数的34.93％).1 220例HFMD标本病毒核酸检测,结果 EV核酸阳性952例(78.03％),其中CoxA6占29.18％,EV71占20.66％.CoxA16占18.85％,CoxA10占4.43％,Echo30占0.08％,未分型占4.84％.结论 龙岩市HFMD发病以5岁以下儿童为主,跟往年相比2014～2015年HFMD病原学发生明显的变化,以CoxA6为主.加强病原学监测,做好5岁以下散居儿童HFMD防控,是当前防控工作的重点.
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濮阳市首次柯萨奇病毒A6实验室检测
目的 建立实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(real-time RT PCR)法对手足口病病例标本进行柯萨奇病毒A6(CoxA6)病原检测,明确病原,为手足口病的防治对策提供依据.方法 用real-time RT-PCR法对2015年5月-6月份手足口病标本进行EV(总肠道病毒)、EV71、CoxA 16核酸检测,对其他肠道病毒(非EV71和非CoxA6)阳性标本再进行CoxA6核酸检测,选取CoxA6核酸1份阴性和3份阳性提取物,送河南省疾病预防控制中心复核验证检测的准确性.结果 167份标本中EV71阳性17份,CoxA16阳性13份,其他肠道病毒阳性61份;4份CoxA6核酸省级验证结果一致.结论 CoxA6是濮阳市手足口病的又一主要病原,在普通和重症病例中都存在,real-time RT-PCR法用于Cox-A6检测能为临床诊断和疾病预防控制提供可靠数据.
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69例手足口病临床特点及合并甲损伤相关因素分析
目的 探讨手足口病临床特点及合并甲损伤相关因素分析.方法 采集2014年3月-2015年9月在郑州市儿童医院感染科临床诊断的69例手足口病患儿的临床资料和粪便标本,采用实时荧光定量PCR法进行肠道病毒核酸检测;于患儿出院后1周,以后每隔2周随访至30周,询问患儿有无甲损伤,并详细记录.结果 手足口病致病原以EV71及CA16为主,2种病原共占62.3％ (43/69),其次是CA6,占43.5％(30/69).甲损伤与发热、食欲差、咽喉炎、上呼吸道感染症状、CA16感染、EV71感染及神经系统症状等无明显相关性(P＞0.05);甲损伤与口腔疱疹、浅溃疡面,手、足底、臀部斑丘疹、丘疱疹及CA6感染有相关性.结论 CA6已经成为手足口病优势病原;甲损伤可能与多种肠道病毒感染有关.
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柯萨奇病毒A6外壳蛋白VP1基因重组表达及活性鉴定
目的 表达柯萨奇病毒A6(CVA6)外壳蛋白VP1,鉴定重组蛋白免疫活性,为CVA6血清学检测试剂和疫苗研究提供依据.方法 利用PCR技术从HN421/HN/CHN/2011河南分离株基因组扩增VP1基因,经酶切连接到表达载体pET30a中,转化大肠杆菌(BL21DE3);用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,并对重组蛋白进行纯化,SDS-PAGE和Western blot方法对重组蛋白分析鉴定其免疫活性.结果 PCR方法扩增的VP1基因长度为980 bp;经PCR扩增和测序鉴定插入到表达载体的基因片段与预期目的片段相一致;SDS-PAGE结果显示表达产物分子量为34 kDa;经大肠杆菌高效表达和纯化获得了重组蛋白CVA6-VP1,通过Western blot分析,该重组蛋白与手足口病患者血清反应产生特异杂交带.结论 本研究成功克隆并构建了CVA6 VP1基因高效原核表达系统,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为EV71诊断试剂的研究奠定了基础.
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2016年北京某幼儿园一起柯萨奇病毒A6引起的聚集性手足口病分子流行病学分析
目的 了解2016年北京市某幼儿园一起手足口病聚集性疫情CA6的分子流行病学特征,分析其变异情况.方法 用实时荧光PCR对该聚集性疫情标本进行初步病原学鉴定.提取核酸,对其VP1区全长序列进行RT-nPCR扩增和测序.从Genbank中选取不同年代不同地域的CA6参考序列,利用生物信息学软件进行同源性和系统进化分析.结果 共扩增到3条CA6 VP1序列(Genbank登录号为KY231153-KY231155),3株CA6与Genbank参考序列在VP1区的核苷酸序列同源性为83％～98％.进化分析表明,该3株CA6与2012年以来我国流行的CA6在同一进化树分支上.结论 引起此次聚集性疫情的CA6毒株与2012年以来我国流行的CA6毒株亲缘关系密切,未发生明显变异.
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不同病原所致手足口病临床特征分析
目的 对不同病原所致手足口病患儿临床表现进行回顾性分析,总结其临床特点,为预防该病提供科学依据.方法 选取2014年11月-2015年10月于海口市中医院儿科就诊的1 896例临床诊断为手足口病患儿的临床资料,采集患儿咽拭子标本,使用荧光定量聚合酶链反应试剂盒进行病毒核酸检测,分析其结果.结果 1 896例手足口病患者样本中,检出肠道病毒71(EV71)感染419例(22.10％),柯萨奇病毒A16(CA16)感染299例(15.77％),CA6感染328例(17.30％).CA6组发病平均年龄为(2.91±2.12)岁,较其他两组发病平均年龄偏小,与其他两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);CA6组男女比例为1.87:1.00,与CA16组比较差异有统计学意义(P ＜0.05);CA6组皮疹多样性显著,更易出现在躯干,与其他两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);CA6组与EV71组相比皮疹较少出现在足部,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);CA6组发热率75.61％,高于其他两组,与其他两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);EV71组和CA16组患者主要集中在4～8月,而CA6组流行高峰期主要集中在7～11月,与其他两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 近年来CA6已成为儿童手足口病新的流行病原之一,其发病年龄较小,皮疹多样性显著,更易出现在躯干,多数患儿有发热症状,流行高峰期主要集中在7～11月.
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河源市1起柯萨奇病毒A6型手足口病暴发疫情的调查分析
目的 分析河源市1起由柯萨奇病毒A6型(CV A6)病毒引起的手足口病暴发疫情的流行病学特征,为今后预防控制CV A6型手足口病暴发疫情提供参考依据.方法 按照《广东省手足口病监测方案(2010版)》对河源市某幼儿园儿童进行流行病学调查;采集出现病例班级的所有儿童粪便样本进行病毒核酸检测.结果 首例病例5月6日发病,末例病例5月14日发病,疫情历时9d.共报告30例临床诊断病例(其中实验室确诊24例),病例年龄为4～6岁,男生罹患率为44.45％ (16/36),女生罹患率为36.85％ (14/38),差异无统计学意义(P＞0.05).病例分布于2个班,其中中一班的罹患率为27.03％(10/37),中三班的罹患率为54.06％(20/37),差异有统计学意义(P＜0.05).采集2个班儿童粪便样本74份,检出CV A6病毒阳性33份,阳性率为44.6％;其中30例临床诊断病例中检出24例CV A6病毒核酸阳性,阳性率为80.0％.结论 该起疫情为河源市首次发现的由CV A6病毒引起的手足口病暴发疫情,病毒传播速度快,途径多,今后应加强对肠道病毒的监测.
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柯萨奇病毒A6逆转录PCR检测方法的建立
目的 设计柯萨奇病毒A6(CV-A6)特异性引物,建立稳定可靠的一步法逆转录PCR检测方法.方法 针对CV-A6 VP1基因保守序列,设计特异性引物,建立和优化反应体系和扩增程序.对检测方法的敏感性、特异性进行评估,在临床标本的检测中对其可靠性进行评价.结果 设计的CV-A6特异性引物及建立的逆转录PCR检测方法可成功扩增CV-A6 VP1基因上的特定序列.当引物终浓度为0.3-3.0μM,退火温度为54-60℃时,扩增效果良好.该方法灵敏度达1.17 × 102copies/μl,与其它多种肠道和非肠道病毒无假阳性反应.使用本方法从487份临床标本中检测出CV-A6阳性标本84份,扩增产物电泳条带清晰,测序结果符合.结论 本研究所设计的CV-A6特异性引物及建立的逆转录PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强的优点,在对临床标本的检测中稳定可靠.该方法为CV-A6型手足口病的监测和检验提供了新的技术手段.
