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SOX4基因在前列腺癌中的表达及二烯丙三硫对其表达的调节作用
目的 研究SOX4基因在前列腺癌患者中的表达；探讨二烯丙三硫(DATS)对SOX4表达阳性前列腺癌细胞的生物学作用及对SOX4表达的调节作用.方法 采用免疫组织化学PV-9000二步法检测141例前列腺癌患者SOX4的表达,观察其与临床病理指标和预后的关联.采用不同浓度(0、20、40、60 μmol/L)DATS处理前列腺癌Vcap细胞株,细胞增殖活性MTS法测定Vcap细胞的增殖能力；细胞体外侵袭实验检测40 μmol/L DATS对Vcap细胞侵袭能力的作用；实时定量PCR(Real-time PCR)检测40 μmol/L DATS作用后,Vcap细胞中SOX4mRNA的表达水平变化.结果 SOX4蛋白在21％(28/135)的前列腺癌患者中过表达,与Gleason评分、远处转移呈正相关(P＜0.05).SOX4是影响患者生存的独立预后因素.体外实验显示,20 ～ 60 μmol/L DATS对前列腺癌细胞株Vcap的生长有较明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.40 μmol/L DATS明显抑制Vcap细胞的侵袭能力,并在mRNA水平上下调SOX4的表达.结论 SOX4的过表达提示前列腺癌患者预后不良.DATS抑制前列腺癌Vcap细胞的增殖和侵袭能力,并在mRNA水平上显著下调SOX4的表达.
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二烯丙三硫对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭的抑制及对uPA系统的调节
目的 研究二烯丙三硫( DATS)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭能力的影响及对尿激酶型纤溶酶激活物(uPA)系统的调节作用.方法 实时定量PCR法(real-time PCR)检测乳腺癌细胞株uPA系统中uPA、uPA受体(uPAR)和uPA抑制物(PAI-1)的表达；使用不同浓度DATS处理乳腺癌细胞,MTS比色法测定细胞的增殖能力；Matrigel体外浸润实验检测DATS(20 ～ 60 μmol/L)对细胞浸润能力的影响；Transwell小室迁移实验和划痕试验评价60 μmol/L DATS对细胞迁移能力的影响；RT-PCR和Western blot分别测定60 μmol/L DATS作用后,乳腺癌细胞中uPA、uPAR和PAI-1 mRNA和蛋白表达的变化;ELISA法检测细胞培养液中PAI-1蛋白含量的变化.结果 20 ～80μmol/L DATS对高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.60 μmol/L DATS明显抑制MDA-MB-231细胞的浸润和迁移能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达,但对uPA和uPAR的表达水平无显著影响.结论 DATS抑制MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达.
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二烯丙三硫提高胸苷激酶基因系统对前列腺癌细胞杀伤效应的研究
目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦( HSV-TK/GCV)自杀基因系统联合二烯丙三硫( DATS)对前列腺癌(PCa)细胞PC-3的协同杀伤效应及其机制.方法 脂质体将TK基因转染PC-3构建PC-3/TK细胞,噻唑蓝(MTT)法、细胞形态学、流式细胞仪分别检测 GCV、DATS及两者联合对PC-3/TK生长及凋亡的影向；Western blot测定B淋巴细包/白血病-2(bcl-2)、bax、bcl-xL/xS、细胞色素C、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶( Caspase)-9表达变化；比色法测定Caspase-3活性.结果 GCV、DATS均能抑制PC -3/TK生长,DATS可明显提高GCV的杀伤效应；DATS( 15 μmol/L)联合GCV(5 μmol/L)作用48 h的细胞生存率为(35.0±2.8)％,低于单独应用GCV( 68.0±1.8)％和DATS(63.9±5.9)％,两者具有协同抑瘤作用；联合组细胞凋亡率明显增高,并更能显著抑制bcl-2、bcl-xL的表达,促进细胞色素C释放、Caspase-9裂解及Caspase-3的活性增加.结论 HSV-TK/GCV系统联合DATS可通过共同诱导肿瘤细胞凋亡发挥协同作用,抑制PCa细胞生长,该机制可能与相关凋亡蛋白的表达及活性变化有关.
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多西紫杉醇联合二烯丙三硫协同诱导前列腺癌细胞凋亡的研究
[目的]探讨多西紫杉醇联合二烯丙三硫(DATS)对前列腺癌PC-3细胞的协同杀伤效应及其机制.[方法]PC-3细胞接种96孔板,分别给予多西紫杉醇(5～60 nmol/L)和DATS(5～60μmol/L)单药处理24、48、72 h;联合用药采用15μmol/L DATS联合不同浓度多西紫杉醇(5～ 60 nmol/L)处理48 h.MTT法检测多西紫杉醇和(或)DATS对PC-3细胞生长的影响.DAPI染色、流式细胞仪检测多西紫杉醇、DATS及二者联合对PC-3细胞凋亡和细胞周期的影响;Western-blot测定Bcl-2、Bax、Bcl-xL/xS及细胞色素C、caspase-9、caspase-3的表达及活性变化.[结果]多西紫杉醇、DATS均能抑制PC-3细胞的生长,DATS可明显提高多西紫杉醇的杀伤效应,DATS(15 μmol/L)联合多西紫杉醇(10 nmol/L)作用48 h的细胞生存率为(50.1±1.0)％,低于多西紫杉醇(67.4±1.0)％和DATS(69.2±1.8)％,二者具有协同抑瘤作用;联合组使细胞凋亡率及G2/M期细胞比率明显增高,并更能显著抑制Bcl-2、Bcl-xL的表达,而且联合组使细胞色素C的释放及caspase-9、caspase-3的裂解活化时间提前了8h.[结论]多西紫杉醇及DATS共同诱导细胞凋亡是二者发挥协同效应抑制前列腺癌细胞生长的重要机制,其可能与细胞周期阻滞、Bcl-2、Bcl-xL的表达降低、细胞色素C的释放及caspase-9、caspase-3的活性变化有关.
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二烯丙三硫抑制人前列腺癌细胞生长
[目的]研究二烯丙三硫(DATS)对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用及相关机制.[方法]MTT法测定DATS对PC-3细胞生长的影响;细胞形态学,流式细胞仪(FCM)等检测细胞凋亡;western blot、比色法分别检测凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和Bcl-xL/Bcl-xS的表达以及Caspase-3活性变化.[结果]DATS明显抑制PC-3细胞的生长,呈浓度和时间依赖性;DATS作用72 h的IC_(50)为14 μmol/L;14 μmoi/L DATS作用PC-3细胞不同时间后,细胞凋亡率增高;western blot显示凋亡抑制蛋白Bcl-2、Bcl-xL表达减少,比色法表明Caspase-3活性增高.[结论]DATS诱导细胞凋亡是其抑制前列腺癌PC-3细胞生长的重要机制,该机制可能与Bcl-2、Bcl-xL和Caspase-3表达及活性变化有关.
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吡柔比星联合二烯丙三硫抑制膀胱癌细胞生长的协同作用研究
目的 探讨吡柔比星(THP)联合二烯丙三硫(DATS)对膀胱癌细胞T24的协同杀伤效应及其机制.方法 MTT法、TUNEL法、流式细胞仪分别检测THP、DATS及二者联合对T24细胞生长、细胞周期及凋亡的影响;western-blot测定Bcl-2、Bax的表达变化;比色法测定caspase-3活性.结果 THP、DATS均能抑制T24细胞生长,DATS可明显提高THP的杀伤效应;THP (0.25 mg/L)联合DATS(3 mg/L)作用48 h的细胞生存率为(32.3±2.6)％,低于单独应用THP (63.2±1.4)％和DATS (61.9±4.2)％,二者具有协同抑瘤作用;联合药物组可明显提高细胞凋亡率及G2/M期细胞比率,并更能显著抑制Bcl-2的表达,促进caspase-3的活性增加.结论 THP联合DATS可通过共同诱导肿瘤细胞凋亡发挥协同作用,抑制膀胱癌细胞生长,该机制可能与细胞周期阻滞、Bcl-2的表达及caspase-3的活性变化有关.
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二烯丙三硫对人前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响及与uPA系统关系的初探
目的:研究二烯丙三硫(DATS)对人前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响及对尿激酶型纤溶酶激活物(uPA)系统的调节作用.方法:细胞增殖活性(MTS)比色法测定20、40、60 μmol· L-1 DATS处理前列腺癌PC-3细胞24、48、72 h后PC-3细胞的增殖能力;细胞体外侵袭试验检测20、40、60 μmol·L-1 DATS对PC-3细胞侵袭能力的作用;划痕试验观察40 μmol·L-1 DATS处理PC-3细胞24h后PC-3细胞迁移能力;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)法分别检测40 μmol·L-1 DATS作用PC-3细胞后的uPA、uPAR和PAI-1的mRNA及其蛋白表达水平.结果:20、40、60 μmol·L-1DATS对PC-3细胞的生长均有较明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性;DATS呈浓度依赖抑制细胞的浸润能力,其中40 μmol·L-1与体内试验更接近;40 μmol· L-1DATS明显抑制细胞的迁移能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达,但对uPA和uPAR的表达无显著影响.结论:DATS抑制PC-3细胞的增殖、浸润和迁移,该效应可能与DATS显著上调PAI-1的表达有关系.
