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瘦素对HTR8-SVneo细胞增殖的影响及调控机制
目的 研究瘦素(Leptin)对HTR8-SVneo滋养细胞系增殖的影响及对DNA结合和分化抑制剂(ID)分子表达水平的影响,探讨Leptin对HTR8-SVneo细胞增殖作用的调节机制.方法 体外培养HTR8-SVneo滋养细胞,MTT法检测Leptin不同质量浓度(0、10、50、100、250、500 ng/mL)刺激后细胞增殖情况.HTR8-SVneo细胞培养体系中加入Leptin(0、100、500 mg/mL),RT-PCR检测瘦素受体(Leptin R)各亚型表达,实时定量PCR检测ID分子表达,Western Blot检测ID2表达.SiRNA干扰ID2分子后,分为Leptin (0 ng/mL)、Leptin( 100 ng/mL)、Leptin(500 ng/mL)、Leptin(0 ng/mL)+ ID2-siRNA、Leptin( 100 ng/mL)+ ID2-siRNA、Leptin(500 ng/mL)+ ID2-siRNA,MTT检测Leptin对HTR8-SVneo滋养细胞增殖的影响.结果 与Leptin(0 ng/mL)比较,高质量浓度Leptin( 100、250、500 ng/mL)促进HTR8-SVneo细胞增殖(P＜0.05)；HTR8-SVneo细胞表达除HuB219.2外的全部受体亚型；Leptin以剂量依赖方式促进HTR8-SVneo细胞ID2分子及OB-RL表达(P＜0.05)；ID2-siRNA抑制ID2表达并逆转Leptin对滋养细胞增殖的促进作用.结论 Leptin可能通过Leptin R-ID2途径促进HTR8-SVneo细胞增殖,为阐明滋养细胞增殖调控机制提供了新的基础数据.
关键词： 瘦素 瘦素受体 HTR8-SVneo细胞 分化抑制因子2 增殖 -
分化抑制因子2在先天性肾盂输尿管连接部梗阻患儿肾盂输尿管连接部组织中的表达
目的 探讨先天性肾盂输尿管连接部梗阻(PUJO)患儿肾盂输尿管连接部组织中分化抑制因子2 (Id2) mRNA的表达情况.方法 收集20例接受肾盂成形术的PUJO患儿的肾盂输尿管连接部组织,10例对照组标本来自肾母细胞瘤患儿无肿瘤转移的肾盂输尿管组织.按照部位不同将PUJO组分为扩张肾盂、狭窄段及狭窄段下正常输尿管;对照组分为肾盂和输尿管.用半定量反转录-PCR检测Id2 mRNA在不同组间表达水平.结果 PUJO组:Id2 mRNA在扩张肾盂、狭窄段输尿管间表达差异无统计学意义(P>0.05),而此2组与狭窄段下正常输尿管比较均有降低(Pa<0.05);对照组:肾盂和输尿管Id2 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);PUJO组扩张肾盂、狭窄段输尿管中Id2 mRNA的表达与对照组中肾盂、输尿管表达比较均显著降低(Pa<0.05),而PUJO 组狭窄段下正常输尿管Id2 mRNA表达与对照组肾盂和输尿管比较差异均无统计学意义(Pa>0.05).结论 Id2基因可能在PUJO的发病机制中发挥重要作用.
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BMP-7对高糖环境下肾小管上皮细胞Id2和E2A蛋白表达的影响
目的：通过观察高糖环境下给予外源性骨形态发生蛋白-7（BMP-7）对肾小管上皮细胞（NRK-52E）表达分化抑制因子2（ Id2）和转录因子E2A的影响，探讨BMP-7减轻高糖诱导的肾小管纤维化病变的可能机制。方法：将体外培养的肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组：对照（control）组、高糖（HG）组和不同浓度BMP-7（10μg／L和20μg／L）干预组，HG组和干预组分别设12 h、24 h和48 h 3个时点。 Western blot方法检测Id2、E2A、上皮细胞钙粘蛋白（ E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原（ Col-Ⅰ）蛋白的表达，real-time PCR方法检测Id2 mRNA的表达。结果：与control组相比，HG组Id2的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白水平明显下调，E2A、α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白水平明显上调（ P＜0.05）；与HG组相比，20μg／L BMP-7干预组Id2的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白水平均较同时点显著上调，E2A、α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白水平显著下调（P＜0.05）。相关性分析结果显示，Id2蛋白与E2A蛋白表达呈显著负相关（P＜0.05）。结论：BMP-7可阻断高糖诱导的肾小管上皮细胞的纤维化，其机制可能与促进Id2蛋白并抑制E2A蛋白的表达有关。
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携带增强绿色荧光蛋白基因的Id2真核表达载体构建
目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,为骨骼肌的组织工程研究提供有效的分子工具.方法:利用RT-PCR的方法扩增出Id2全长cDNA,利用T4 DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2 cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoRI酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达载体,构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2,经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDNA片段大小和序列的正确性;并通过细胞转染技术将Id2基因导入L6成肌细胞中.结果:经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向Id2cDNA片段,获取了转染外源性Id2基因的L6细胞.结论:我们成功构建了同时携带有G418筛选位点和增强绿色荧光蛋白的Id2真核表达载体.
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食管鳞癌中分化抑制因子2的表达及其与E-钙黏蛋白表达的关系
目的 观察食管鳞癌组织中分化抑制因子2(Id2)的表达,及其与各临床病理因素和E-钙黏蛋白(E-cad)表达的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测67例食管鳞癌和23例癌旁正常食管上皮组织中Id2和E-cad的表达,并结合临床病理资料进行分析.结果 Id2在食管鳞癌和正常食管上皮中组织表达阳性率分别为92.53％和17.39％,两者间差异有统计学意义(P ＜0.05);Id2蛋白的表达与食管鳞癌的浸润深度、TNM分期有关,而与性别、年龄、分化程度及淋巴结转移无关;Id2与E-cad的表达呈负相关(rs=-0.255,P＜0.05).结论 Id2在食管鳞癌的发生和侵袭进展中起重要作用,其作用可能与调控E-cad的表达有关.
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Id-2在结直肠癌组织中的表达及临床意义
目的：探讨分化抑制因子2(Id-2)在人结直肠癌组织中的表达及其与患者临床病理参数和预后的关系。方法选择2013年1月至2015年6月在我院手术治疗的结直肠癌患者56例为研究对象。采用免疫组织化学法检测所有患者肠癌组织和其中26例患者癌旁正常肠上皮组织中Id-2的表达水平，比较阳性与阴性表达者间的年龄、性别、病理分级、临床分期、淋巴结转移和预后的差异。结果免疫组织化学染色显示，Id-2主要表达于胞浆，其在肠癌组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为64.3%(36/56)和34.6%(9/26)，癌组织阳性表达率明显高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)；临床病理特征分析显示，在结直肠癌中，Id-2阳性表达与患者TNM分期(P<0.05)、病理分级(P<0.05)和淋巴结转移(P<0.05)有关，阳性患者Ⅲ~Ⅳ、低分化及有淋巴结转移者比例明显高于阴性患者，差异均有统计学意义(P<0.05)；Id-2阳性患者的中位无疾病进展生存时间为24.7个月，阴性患者为38.5个月，两组比较差异有统计学意义(HR=2.23，95%CI：1.02~4.87，P<0.05)。结论 Id-2蛋白可能与结直肠癌的发生发展有关，且阳性患者预后较差。
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分化抑制因子Id2在骨骼肌再生中的作用研究进展
目的 综述分化抑制因子2(inhibitor of diggerentiation 2,Id2)在骨骼肌再生中的作用研究进展.方法 广泛查阅近年来Id2生物学特性及其在骨骼肌再生中的作用相关文献,并综合分析.结果 Id2通过结合E蛋白形成异二聚体,阻止生肌调节因子(myogenic regulatory factors,MRFs)与E蛋白结合而抑制MRFs的转录活性,抑制骨骼肌细胞分化.结论 Id2在骨骼肌再生中起着重要作用.
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分化抑制因子2在肿瘤中的研究进展
分化抑制因子2(Id2), 属于螺旋-环-螺旋(HLH) 蛋白家族的Id家族成员,负调控bHLH转录因子的活性.自1990年发现以来,在肿瘤细胞增殖、分化、侵袭等方面研究不断深入,现已成为研究细胞功能的重要组成部分,进一步研究Id2不仅可以为人类肿瘤的诊断和治疗提供新的科学依据,还可以为靶向肿瘤治疗提供新的方法.
