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间歇性高糖对NRK-52E细胞抗氧化能力作用研究
目的 探讨间歇性高糖抑制大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E抗氧化能力.方法 实验开始72 h后,Western blot检测空白组、正常葡萄糖组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖干预组(25 nmol/L葡萄糖)、间歇性高糖干预组(5 mmol/L葡萄糖与25 mmol/L葡萄糖交替)中氧化物歧化酶-1(SOD-1)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)在NRK-52E细胞表达.一氧化氮合酶(eNOS)试剂盒应用液闪仪测定3[H]的放射强度,活性氧(ROS)含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测.结果 高浓度葡萄糖及间歇性高糖均下调SOD-1及NADPH表达,而提高ROS含量,间歇性高糖作用更显著.间歇性高糖eNOS含量低于持续性高糖组.结论 间歇性高糖抑制肾小管导管上皮细胞抗氧化能力显著.
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尾加压素Ⅱ对大鼠近端肾小管上皮NRK-52E细胞增殖和细胞周期的影响
目的 探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠近端肾小管上皮NRK-52E细胞增殖和细胞周期的影响及其机制.方法 在NRK-52E细胞培养液中加入10-10、10-9 、10-8和10-7mol/L UⅡ,同时设UⅡ活性阻断组:UⅡ+尼卡地平和UⅡ+EDTA,以单纯DMEM为对照组.培养48 h后,采用5-溴-2′-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测各组细胞的增殖活性,流式细胞术分析细胞周期.结果 UⅡ(10-10～10-8mol/L)以浓度依赖方式促进NRK-52E细胞BrdU掺入(A值分别为0.491±0.038、0.291±0.024和0.281±0.037),其中以10-8mol/L UⅡ的作用明显,10-7mol/L UⅡ对NRK-52E细胞增殖的影响与对照组比较差异无显著意义.UⅡ影响NRK-52E细胞周期,在10-10～10-8 mol/L浓度范围内增加S期细胞百分比(分别为26.96%±3.35%、44.26%±3.28%、48.12% ±2.22%).尼卡地平和EDTA均可以降低UⅡ诱导NRK-52E细胞的BrdU掺入增加,降低S期细胞百分比.结论 UⅡ具有较强促进NRK-52E细胞增殖的作用,但大剂量则无此作用,其诱导NRK-52E细胞增殖作用部分是通过Ca2+内流来介导的.
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丹参注射液对AngⅡ诱导NRK-52E细胞损伤的保护作用
目的 考察丹参注射液对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)损伤的保护作用.方法 将NRK-52E细胞分为对照组、模型组(AngⅡ)、丹参注射液组(AngⅡ+丹参注射液),MTT法检测其增殖,免疫荧光法与Western blot法分别检测PI3K、p-PI3K蛋白表达.结果 与对照组比较,AngⅡ作用24 h后可显著抑制细胞增殖及PI3K、p-PI3K蛋白表达,而丹参注射液均能加以恢复.结论 丹参注射液能减轻AngⅡ对NRK-52E细胞的损伤作用,其机制可能与激活PI3 K/Akt信号通路有关.
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高糖诱导NRK-52E细胞甲状旁腺素相关肽及其受体1表达及氯沙坦干预研究
为探讨甲状旁腺素相关肽(PTHrP)及其受体1(PTH1R)在高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E表达及氯沙坦对其表达干预作用.应用RT-PCR及Western印迹检测空白组(0 mmol/L),正常葡萄糖组(5 mmol/L)、中高浓度葡萄糖组(16.7 mmol/L)及高浓度葡萄糖组(25 mmol/L)中PTHrP及PTHIR在NRK-52E细胞表达.然后10 μoml/L氯沙坦及25 mmol/L葡萄糖分别干预72 h,应用Western印迹检测PTHrP及PTM1R表达情况.结果发现高浓度葡萄糖能上调PTHrP/PTH1R蛋白(PTHrP:0.63±0.12,0.68±0.06,1.02±0.11和1.04±0.08;PTH1R:0.88±0.05,0.87±0.10,1.05±0.11和1.12±0.09)及mRNA表达(PTHrP:0.66±0.08,0.84±0.13,1.57±0.15和1.73±0.21;PTH1R:0.26±0.08,0.28±0.07,2.35±0.10和2.47±0.05).氯沙坦能显著下调高浓度葡萄糖状态下PTHrP及PTH1R表达(PTHrP 0.74±0.15,PTH1R 0.98±0.06,均P<0.01).提示氯沙坦可以抑制高浓度葡萄糖诱导PTHrP/PTH1R的表达水平,从而可能影响肾小管导管上皮转分化.
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血管紧张素Ⅱ对高糖诱导NRK-52E细胞转分化作用研究
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E转分化的干预作用.方法 细胞培养72 h后,Western blot检测对照组(0 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、血管紧张素Ⅱ干预组(10 nmol/L AngⅡ)、高糖血管紧张素Ⅱ干预组(10 nmol/L AngⅡ+25 mmol/L葡萄糖)中转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2(MMP2)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及甲状旁腺素相关肽(PTHrP)在NRK-52E细胞中的表达.活性氧(ROS)含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测.结果 高浓度葡萄糖上调TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达.AngⅡ明显上调高浓度葡萄糖状态下TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA和PTHrP的表达,并提高ROS含量.结论 AngⅡ可以促进高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化.
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牛磺酸对肾NRK-52E细胞缺氧/复氧损伤的保护及初步机制
目的 观察牛磺酸(Tau)对NRK-52E细胞缺氧/复氧 (H/R)损伤的保护作用及初步机制.方法 用NRK-52E细胞缺氧8 h复氧12 h培养建立了H/R模型,流式细胞仪检测凋亡率和胞内游离钙离子浓度,RT-PCR和Western blot检测GRP78、Caspase-12、Caspase-3 mRNA和蛋白表达.结果 与对照组比较,H/R组细胞凋亡率上升,GRP78、Caspase-12及Caspase-3 mRNA和蛋白表达均明显增高(P<0.01),胞质游离钙离子浓度也升高(P<0.01);与H/R组比较,各浓度牛磺酸处理组的细胞Caspase-3活性和凋亡率明显下降,胞质游离钙和GRP78、Caspase-12及Caspase-3 mRNA和蛋白表达均有明显降低(P<0.01).结论 牛磺酸对NRK-52E细胞H/R损伤有较好的抑制作用,且呈一定的剂量依赖性,其机制可能是调节胞内钙稳态、抑制GRP78、Caspase-12及Caspase-3表达,减少了细胞凋亡.
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氯沙坦及培哚普利对高糖诱导NRK-52E细胞转分化作用研究
目的:探讨氯沙坦及培哚普利对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E转分化干预作用.方法:作用72 h后,Western blot检测空白组、高糖组、高糖氯沙坦干预组、高糖培哚普利干预组以及高糖氯沙坦培哚普利联合干预组中转化因子β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶2、α平滑肌肌动蛋白以及甲状旁腺素相关肽在NRK-52E细胞表达.活性氧含量应用CM2H2DCFDA检测.结果:高浓度葡萄糖能上调转化因子β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶2、α平滑肌肌动蛋白以及甲状旁腺素相关肽表达.氯沙坦及培哚普利能显著下调高浓度葡萄糖状态下转化因子β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶2、α平滑肌肌动蛋白和甲状旁腺素相关肽表达,以及降低活性氧含量.结论:氯沙坦及培哚普利可以抑制高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化.
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BMP-7对高糖环境下肾小管上皮细胞Id2和E2A蛋白表达的影响
目的：通过观察高糖环境下给予外源性骨形态发生蛋白-7（BMP-7）对肾小管上皮细胞（NRK-52E）表达分化抑制因子2（ Id2）和转录因子E2A的影响，探讨BMP-7减轻高糖诱导的肾小管纤维化病变的可能机制。方法：将体外培养的肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组：对照（control）组、高糖（HG）组和不同浓度BMP-7（10μg／L和20μg／L）干预组，HG组和干预组分别设12 h、24 h和48 h 3个时点。 Western blot方法检测Id2、E2A、上皮细胞钙粘蛋白（ E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原（ Col-Ⅰ）蛋白的表达，real-time PCR方法检测Id2 mRNA的表达。结果：与control组相比，HG组Id2的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白水平明显下调，E2A、α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白水平明显上调（ P＜0.05）；与HG组相比，20μg／L BMP-7干预组Id2的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白水平均较同时点显著上调，E2A、α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白水平显著下调（P＜0.05）。相关性分析结果显示，Id2蛋白与E2A蛋白表达呈显著负相关（P＜0.05）。结论：BMP-7可阻断高糖诱导的肾小管上皮细胞的纤维化，其机制可能与促进Id2蛋白并抑制E2A蛋白的表达有关。
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甲状旁腺激素相关肽在高糖诱导NRK-52E细胞转分化中的作用
目的 探讨甲状旁腺素相关肽在高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E转分化作用.方法 应用RT-PCR及Western blot检测无糖组(无糖培养基培养),正常葡萄糖组(含5 mmol/ L葡萄糖DMEM培养基培养)组及高浓度葡萄糖组(含16.7 mmol/L葡萄糖DMEM培养基培养)中甲状旁腺素相关肽(parathyroid hormone-related peptide,PTHrP)及其受体1在大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E表达.10 pmol/L PTHrP及16.7 mmol/L葡萄糖分别干预72 h,应用Western blot检测转化因子β、金属蛋白酶2、Ⅰ型胶原及α平滑肌肌动蛋白表达情况.ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测.结果 与空白组和正常葡萄糖组相比,高浓度葡萄糖能显著上调PTHrP(P<0.05, P<0.01)和甲状旁腺激素受体1(Type 1 receptor parathyroid hormone-related protein,PTH1R) (P<0.01, P<0.05)蛋白及 PTHrP mRNA(P<0.01)表达,PTH1R mRNA在高浓度及正常葡萄糖浓度组的表达高于空白组(P<0.01).对比空白组,PTHrP能显著上调NRK-52E细胞转化因子β1(P<0.01)、Ⅰ型胶原(P<0.01)及α平滑肌肌动蛋白(P<0.01)表达,而在高浓度葡萄糖状态下,其表达上调更显著(P<0.05, P<0.01).金属蛋白酶2在PTHrP及高浓度葡萄糖共同干预下表达上调(P<0.01).PTHrP及高血糖均可以升高NRK-53E细胞ROS含量(P<0.01, P<0.01).结论 高浓度葡萄糖可能通过调控PTHrP/PTH1R的水平从而影响肾小管导管上皮转分化.
关键词： 甲状旁腺激素相关蛋白质 细胞转分化 NRK-52E细胞 葡萄糖 体外研究 -
晚期糖基化终产物对高糖诱导NRK-52E细胞的转分化作用
目的: 探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E的转分化干预作用.方法: 大鼠肾小管导管上皮细胞株设空白组(不给葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、AGEs干预组(100 mg/L AGEs)、高糖AGEs干预组(100 mg/L AGEs+25 mmol/L葡萄糖),培养72 h后,用Western bolt检测转化因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2(MMP2)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及甲状旁腺素相关肽(PTHrP)在NRK-52E细胞的表达,活性氧(ROS)含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测.结果: 高浓度葡萄糖上调TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达,AGEs显著上调高浓度葡萄糖状态下TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA和PTHrP表达,提高ROS含量.结论: AGEs可以促进高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化.
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紫花前胡素能降低大鼠肾小管上皮细胞活性氧并抑制顺铂诱导的细胞凋亡
目的 研究紫花前胡素抑制顺铂诱导的NRK-52E正常大鼠肾小管上皮细胞凋亡的作用机制.方法 先采用CCK-8法检测(0、10、20、40、80、100、150、200)μmol/L紫花前胡素、(0、5、10、20、30、40、50) μg/mL顺铂处理24h对细胞增殖的影响,确定佳处理剂量;而后采用20 μg/mL顺铂联合(10、50、100) μmol/L紫花前胡素刺激NRK-52E细胞,CCK-8法检测对细胞活力的影响.细胞分为正常对照组、20 μg/mL顺铂刺激组、(10、50、100)μmol/L紫花前胡素处理组.倒置相差显微镜观察细胞形态改变,4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡水平,二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)改变,Western blot法检测细胞凋亡标志蛋白裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)的蛋白水平.结果 与正常对照组相比,顺铂能显著抑制细胞活性,其半数抑制浓度(IC50)约为20 μg/mL;与模型组比较,紫花前胡素预处理后,细胞内ROS水平显著降低,c-caspase-3、c-PARP蛋白水平降低,细胞凋亡减少.结论 紫花前胡素能降低NRK-52E细胞ROS水平并抑制顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡.
