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核酸疫苗pEGFPN1-MLAA34-B7H4IgV的构建及其免疫活性观察
目的 构建pEGFPN 1-MLAA34-B7 H4IgV核酸疫苗,并检测其免疫活性,探讨核酸疫苗抗白血病效应.方法 采用重叠延伸PCR技术扩增急性白血病相关抗原基因MLAA34和负性共刺激分子B7H4的融合基因(MLAA34-B7 H4IgV),并构建核酸疫苗pEGFPN1-MLAA34-B7H4IgV.将28只BALB/c小鼠随机分为P、M、B、MB组各7只,分别在小鼠两侧股四头肌内侧肌内注射磷酸盐缓冲液pEGFPN1、pEGFPN1-MLAA34、pEGFPN1-B7H4IgV、pEGFPN1-MLAA34-B7H4IgV质粒100μg,在0、2、4周各行1次同剂量加强免疫;分别于0、4、8周眼球取血,8周取血后处死小鼠并摘取脾脏.ELISA法检测免疫8周血清中抗体IgG1、IgG2a以及免疫0、4、8周血清细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ,MMT法检测小鼠脾淋巴细胞对单核巨噬细胞THP-1的增殖抑制作用.结果 MLAA34-B7H4IgV融合基因PCR产物电泳检测约为2000 bp,与理论值(1 922 bp)相符;pEGFPN1-MLAA34-B7 H4IgV酶切后电泳检测为5 000～7 500 bp,与理论值(6 655 bp)相符.与同组免疫0周时、同时点P组比较,免疫4、8周时M、B、MB组血清细胞因子IL-2、IL-4水平升高而IFN-γ水平降低(P均＜0.05或＜0.01).与同时点M、B组比较,MB组血清细胞因子IL-2、IL-4水平升高而IFN-γ水平降低(P均＜0.05);M、B组同时点比较,差异无统计学意义.免疫8周,MB组血清IgG1水平高于其他各组(P均＜0.05),其他各组间差异均无统计学意义(P均＞0.05);各组血清IgG2a水平差异均无统计学意义(P均＞0.05).MB组THP-1细胞增殖抑制率高于同效靶比其他各组(P均＜0.05或＜0.01);效靶比为50∶1和25∶1时,M组和B组THP-1细胞增殖抑制率高于高于P组(P均＜0.05),两组之间无差异;效靶比为12.5∶1时,B组THP-1细胞增殖抑制率高于M组、P组(P均＜0.05).结论 成功构建了核酸疫苗pEGFPN1-MLAA34-B7 H4IgV,该疫苗激活了小鼠体内的细胞免疫和体液免疫,具有明显的抗白血病效应.
