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抑制miR-630表达对宫颈癌细胞紫杉醇敏感性的影响及机制
目的 观察制微小RAN-630 (miR-630)表达对宫颈癌细胞紫杉醇(PTX)敏感性的影响,并探讨其机制.方法 将宫颈癌PTX耐药细胞株HeLa-PTX分为3组,抑制组和空载组分别转染miR-630小干扰RNA质粒、对照空载质粒30 nmol/L,空白对照组不转染,48 h后收集细胞.采用MTT法检测PTX对HeLa-PTX细胞的半数抑制浓度(IC50),实时荧光定量PCR法检测细胞中的miR-630、凋亡蛋白酶活化因子(APAF-1) mRNA,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Western blotting法检测凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、Caspase1、Caspase3.结果 抑制组、空载组、空白对照组PTX IC50分别为(35.61±2.87)、(142.57±3.63)、(144.31±2.42) nmol/L,抑制组tPTX IC50低于NC组和空白对照组(P均=0.000).与空载组及空白对照组比较,抑制组miR-630表达量降低而APAF-1 mRNA表达量增加(P均=0.000).抑制组、空载组、空白对照组细胞凋亡率分别为19.60％±2.56％、10.20％±1.08％、8.00％±1.53％,抑制组细胞凋亡率高于空载组和空白对照组(P均=0.000).与空载组及空白对照组比较,抑制组PARP、Caspase1、Caspase3相对表达量增加(P均=0.000).结论 抑制miR-630表达能增强宫颈癌细胞对PTX的敏感性,这可能是通过调节细胞凋亡及APAF-1基因表达实现的.
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垂体腺瘤凋亡蛋白酶活化因子-1基因启动子区甲基化与其mRNA表达
目的 研究凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,APAF-1)基因启动子区甲基化状态及其mRNA表达与临床特征的关系.方法 用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测32例垂体腺瘤组织和6例正常垂体组织APAF-1启动子区甲基化状态与其mRNA表达水平,分析APAF-1基因甲基化和mRNA表达与临床特征的关系.结果 正常垂体组织APAF-1基因mRNA表达未见明显下降或升高,启动子区未发生甲基化.垂体腺瘤组织APAF-1基因mRNA表达下调率为56.3%(18例),其表达显著性低于正常垂体组织(P=0.02 1,P<0.05).APAF-1基因启动子区甲基化率为43.8%(14例).APAF-1 mRNA表达下调的垂体腺瘤组织中启动子甲基化率显著高于无表达下调者(P=0.009).侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤之间APAF-1基因mRNA表达及其甲基化率均无显著差异.结论 垂体腺瘤组织APAF-1,基因mRNA表达下调,APAF-1启动子区甲基化和其mRNA表达下调有关.在垂体腺瘤中,APAF-1基因启动子区甲基化可能是一个重要的分子改变,其在垂体腺瘤发生、发展中有重要意义.
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基底细胞样乳腺癌组织Apaf-1蛋白表达临床意义
目的 检测凋亡蛋白酶活化因子(Apaf-1)在基底细胞样乳腺癌(BLBC)中的表达,分析Apaf-1与BLBC临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化方法检测43例BLBC、57例non-BLBC和60例癌旁正常乳腺组织中Apaf-1蛋白的表达.结果 免疫组化检测结果显示,在BLBC及non-BLBC中Apaf-1的表达的阳性率分别为23.26％和49.12％,明显低于癌旁正常乳腺组织的75.00％,差异均有统计学意义(P＜0.05);Apaf-1的表达与患者年龄无关,与BLBC淋巴结转移、肿瘤大小及临床分期负相关(P＜0.05).结论 BLBC组织低表达Apa-1,Apaf-1可能与BLBC的发生、发展密切相关.
