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长链非编码RNA CCAT2对肝癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响及其机制探讨
目的 观察长链非编码RNA CCAT2(lncRNA CCAT2)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖和侵袭迁移能力的影响,并探讨其机制.方法 将对数生长期的HCC细胞HepG2随机分为A、B、C组,采用Lipofectamine 3000分别瞬时转染对照质粒、小干扰RNA质粒(si-CCAT2)、si-CCAT2+多梳蛋白EZH2过表达质粒.采用Real-time PCR法检测细胞中的lncRNA CCAT2、EZH2 mRNA,Western blotting法检测细胞中的EZH2蛋白,MTT法观察培养24、48、72、96 h细胞增殖能力(OD490),细胞划痕及Transwell实验分别观察细胞的迁移、侵袭能力.结果 与A组比较,B组细胞中lncRNA CCAT2和EZH2的mRNA和蛋白表达水平均下降(P均<0.05);与B组比较,C组胞中EZH2的mRNA和蛋白表达水平均增加(P均<0.05).与A组同时点比较,B组细胞增殖的OD490值降低(P均<0.05);与B组同时点比较,C组细胞增殖的OD490值升高(P均<0.05).与A组比较,B组细胞划痕愈合百分比、穿膜细胞数均下降(P均<0.05);与B组比较,C组细胞划痕愈合百分比、穿膜细胞数均增加(P均<0.05).结论 lncRNA CCAT2可通过上调EZH2的表达促进HCC细胞的增殖、侵袭和迁移,进而促进HCC的发生发展.
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长链非编码RNA CCAT2在肝癌中的作用及其机制
目的 探讨长链非编码RNA CCAT2(LncRNA CCAT2)在肝癌中的作用及机制.方法 选取我院2013年1-6月60例肝癌及其癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其组织中CCAT2的表达,同时培养正常肝细胞L02和人源性肝癌细胞系HepG、H2P、SMMC和HLE细胞,采用qRT-PCR检测细胞中CCAT2的表达,采用siRNA干扰细胞CCAT2表达后,在24、48、72、96 h用CCK-8检测SMMC和HLE细胞增殖;Transwell实验分析细胞迁移和侵袭情况;采用流式细胞仪分析CCAT2对SMMC和HLE细胞周期分布和凋亡的影响;Western blot检测P53、Bcl-2、Caspase-8蛋白的表达.结果 在肝癌组织和肝癌细胞中,CCAT2的表达显著升高(P均＜0.05),CCAT2高表达的患者预后和生存率均较低(P均＜0.05).肝癌细胞中低表达的CCAT2能显著抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭(P均＜0.05).肝癌细胞中低表达的CCAT2也能使肝癌细胞周期停留在Go/G1期并促进细胞凋亡(P均＜0.05).采用siRNA干扰细胞CCAT2表达后,肝癌细胞中P53和Caspase-8蛋白的表达显著升高(P均＜0.05),Bcl-2蛋白的表达显著降低(P＜0.05).结论 CCAT2在肝癌组织和细胞系中高表达,siRNA干扰CCAT2表达后能够抑制细胞增殖、迁移、侵袭以及促进肝癌细胞的凋亡,其机制可能通过升高P53和Caspase-8蛋白的表达和降低Bcl-2蛋白的表达有关.
关键词： 长链非编码RNA CCAT2 肝肿癌 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡
