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肾上腺素对新生大鼠心肌细胞体积的影响及其作用机制
目的 观察肾上腺素(Adr)对新生大鼠心肌细胞体积的影响,并探讨其机制.方法 原代培养新生大鼠心肌细胞,分为观察组和对照组,观察组加入Adr(1 μmol/L),对照组加入等体积PBS,培养48 h.采用CountStar自动细胞计数仪测量各组心肌细胞体积变化;荧光显微镜观察心肌细胞氯通道蛋白3(CLC-3)荧光强度,在所有拍摄条件相同尤其是曝光时间相同的条件下对心肌细胞拍照,用Image Pro Plus分析软件定量分析心肌细胞ClC-3的平均光密度(AOD);Western blotting法检测心肌细胞ClC-3.结果 观察组及对照组心肌细胞体积分别为(964.80±60.00)、(716.28±57.49) μm3,心肌细胞C1C-3的AOD分别为0.037 ±0.012、0.062±0.009,心肌细胞ClC-3的相对表达量分别为0.372±0.027、1.040±0.210,两组比较,P均＜0.05.结论 Adr能诱导新生大鼠心肌细胞肥大,其机制可能与下调ClC-3表达有关.
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加入去甲肾上腺素培养的心肌细胞株H9c2体积变化
目的 观察去甲肾上腺素(NE)对H9c2心肌细胞体积的影响,并探讨其作用机制.方法 取处于对数生长期H9c2细胞分为观察组和对照组,分别加入终浓度为2μmol/L的NE、等体积PBS,继续培养48 h.Countstar自动细胞计数仪测算细胞体积,RealTime-PCR法检测细胞心房钠尿肽(ANF)mRNA,免疫荧光法检测细胞氯通道蛋白3(C1C-3).结果 实验组、对照组细胞体积分别为(2446.0±193.3)和(1 736.0-265.6) μm3,二者比较,P＜0.05.实验组、对照组ANF mRNA分别为1.63-0.14和1.00±0.13,二者比较,P＜0.05.实验组、对照组细胞ClC-3的AOD值分别为0.261±0.062和0.660 ±0.107,二者比较,P＜0.05.结论 NE可导致H9c2细胞体积增大,可能与其上调ANF mRNA表达、抑制ClC-3蛋白表达有关.
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体外培养的牛角膜内皮细胞氯离子通道-3分子的检测
目的检测氯离子通道蛋白3(chloride channel 3,ClC-3)在体外培养的牛角膜内皮细胞(bovine corneal endothelial cell,BCECs)中的表达和定位.方法应用免疫荧光法测定ClC-3在体外培养BCECs的所在部位,RT-PCR和Western印迹法检测ClC-3 mRNA和蛋白的表达.结果在体外培养的BCECs,RT-PCR可以扩增出长度为602 bp的ClC-3的cDNA产物.Western印迹可见到约85 ku的发光条带,细胞膜和部分细胞浆可见到CLC-3的表达.结论体外培养的BCECs在转录和翻译水平均有内源性ClC-3基因表达,表达产物存在定位于细胞膜和内质网部分细胞浆.
