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沉默多药耐药基因逆转大肠癌耐药细胞株LoVo/5-氟尿嘧啶细胞耐药性研究
目的 探讨沉默多药耐药基因(multi-drug resistance 1,MDR1)对大肠癌耐药细胞株LoVo/5-氟尿嘧啶(fluorouracil,Fu)细胞耐药性的逆转作用.方法 将MDR1逆转的大肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu细胞分为EASY-shRNA-MDR1(实验组)、shRNA-control(对照质粒组)和normal(未转染组),3组采用MTT法检测细胞对氟尿嘧啶的敏感性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用RT-PCR法检测细胞MDR1 mRNA表达水平,采用ELISA法检测细胞P-糖蛋白水平,比较3组半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)、耐药指数(resistance index,RI)、MDR1 mRNA和P糖蛋白表达水平、对氟尿嘧啶的敏感性相对逆转率和细胞凋亡率.结果 实验组IC50[(2.197±0.245)g/L]、RI(4.980)、MDR1 mRNA表达水平[(7.380±1.501)×107拷贝/μg]、P-糖蛋白表达水平[(46.569±4.200)％]低于未转染组[(7.283±0.461)g/L、15.221、(8.891±1.362)×108拷贝/μg、(97.810±1.921)％]和对照质粒组[(7.012±0.027)g/L、14.928、(7.346±1.201)×108拷贝/μg、(95.301±2.334)％](P＜0.05),对5-Fu的敏感性相对逆转率(72.2％)、细胞凋亡率[(20.904±0.493)％]高于未转染组[0、(6.215±0.721)％]和对照质粒组[3.2％、(6.580±0.188)％](P＜0.05);未转染组与对照质粒组各指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 RNA干扰可明显抑制P-糖蛋白表达,降低LoVo/5-Fu细胞对药物的耐药性,通过促进细胞凋亡和在mRNA环节中表达而降低耐药性.
