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HIV 核心蛋白质p24文献资料
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HIV-1核心抗原p24基因的表达、纯化及抗原性分析
目的 在原核系统中表达全长HIV-1p24抗原,并对其抗原性进行鉴定.方法 利用PCR技术从HIV-1全基因质粒(BH-10)中扩增p24抗原基因,通过酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达p24抗原.运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳检测插入基因片段的正确性,并用Western Blot(WB)及ELISA法对表达产物的抗原性进行检测.结果 PCR产物和构建的重组质粒pET22b-p24经双酶切插入的外源基因片段均为690 bp,与预期p24抗原全基因片段大小一致.纯化蛋白SDS-PAGE电泳,可见1条相对分子量约26×103的外源表达蛋白带,与预期大小一致,未见杂蛋白带.WB结果显示重组蛋白与HIV-1阳性血清呈特异性反应,与健康人血清没有反应.ELISA检测p24抗原灵敏度为93.94%(62/66),特异性为93.33%(28/30).结论 构建了HIV-1 p24表达载体pET22b-p24,并在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的抗原性,为研制HIV抗体确认试剂奠定了良好的基础.
关键词： HIV 核心蛋白质p24 基因表达 聚合酶链反应 电泳 免疫印迹法
