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14-3-3σ与TPD52L1在低剂量中波紫外线诱导HaCaT细胞辐射损伤中作用研究
目的：探讨14-3-3σ与TPD52L1在低剂量中波紫外线（ UVB）诱导的HaCaT细胞凋亡、增殖和细胞周期中的作用。方法①取对数生长期HaCaT细胞，予低剂量UVB（累计照射剂量为2.97×10－2 J／cm2）照射后培养6～48 h收获细胞，另设不予UVB照射（予假照射）的对照，采用流式细胞分析法检测细胞凋亡率；将HaCaT细胞分为对照组和UVB组，于相应照射处理后0～72 h收获细胞，采用噻唑蓝法检测细胞增殖能力。②取HaCaT细胞随机分为对照组（予假照射）和UVB组，于相应照射处理后0～24 h收获细胞，采用流式细胞术检测G2／M期细胞比例。③予低剂量UVB照射HaCaT细胞后培养3～24 h或3～30 h，收获细胞，另设予假照射的对照，采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测细胞中14-3-3σ与 TPD52 L1的 mRNA 的相对表达水平，采用蛋白质印迹法检测细胞中14-3-3σ与TPD52L1的蛋白相对水平表达。结果①UVB照射后24 h， HaCaT 细胞凋亡率上升至高值（ P＜0.05），增殖能力下降至低值（P＜0.05）。②对照组HaCaT细胞G2／M期比例呈现在假照射后6～12 h维持在高值，至假照射后18 h下降至低值的周期性改变特征；UVB组HaCaT细胞G2／M期比例在照射后6、12和18 h均较对照组上升（P＜0.05），并持续在高值，发生较明显的G2／M期阻滞。③UVB照射后HaCaT细胞中14-3-3σ的mRNA和蛋白相对表达水平均呈现先上升后下降现象。其中，14-3-3σmRNA相对表达水平于照射后3 h上升至峰值（ P＜0.05），于照射后3～12 h维持峰值水平（ P＜0.05），其后逐渐下降，于照射后24 h恢复正常水平；14-3-3σ蛋白相对表达水平于照射后6 h开始上升（P＜0.05），于照射后18 h上升至峰值（P＜0.05），其后逐渐下降，但于照射后30 h仍未恢复正常水平。 TPD52L1 mRNA相对表达水平则呈现先下降后上升现象，于照射后12 h下降至低水平（P＜0.05），其后逐渐升高，于照射后24 h上升至峰值（P＜0.05）；TPD52L1蛋白相对表达水平呈先上升后下降现象，于照射后24 h上升至峰值（P＜0.05），于照射后30 h下降至正常水平（P＜0.05）。结论14-3-3σ和TPD52L1在低剂量UVB诱导HaCaT细胞发生凋亡、增殖和G2／M期阻滞中可能共同发挥重要作用。
