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糖皮质激素对PMA诱导的CD18表达的抑制作用及机制
国内外大量研究表明糖皮质激素(glucocorticoid,GC)能明显抑制包括由于CD18在内的多种粘附分子的表达.以往研究多限于CD18蛋白质水平,无法阐明GC-GR使细胞表面CD18数量减少,是由于合成减少,分解增多,还是细胞内转位过程受到抑制(CD18从胞内储存池脱落并转位至质膜有关).对GC在CD18基因转录水平上的抑制作用极其机制目前研究得很少.目的:探讨GC抑制CD18 mRNA表达的作用及机制.方法:本研究以细胞激活剂PMA诱导下的人组织淋巴瘤细胞系U937细胞和人早幼粒白血病细胞系HL-60为实验模型,用定量RT-PCR法、Northern杂交法、流式细胞术研究GC抑制CD18表达的作用及机制.结果:地塞米松Dex能够明显地抑制PMA诱导U937细胞CD18 mRNA的表达,这种作用具有剂量依赖性,当Dex为10-8mol/L时,其抑制率达50%,10-6mol/L时可达89%.把GR的拮抗剂RU38486与Dex同时处理U937细胞,随着RU38486浓度的升高,Dex对CD18 mRNA表达上调的抑制作用逐渐减弱,当RU38486的浓度达10-6mol/L时,几乎可完全阻断Dex的作用.而单纯用RU38486处理U937细胞,CD18 mRNA表达无明显变化,说明Dex的抑制作用是通过GR来介导的.在U937细胞和HL-60细胞,Dex对CD18膜蛋白表达也有相似的抑制作用.在HL-60细胞,Dex能阻止PMA引起的细胞粘附表型的改变,RU486可逆转Dex的作用.实验还表明PMA能通过PKC激活转录因子NF-κB促进IL-8表达,GR介导的Dex具有明显的抑制作用.结论:Dex对CD18表达的抑制作用是通过GR来介导的.由于CD18的基因启动子上无NF-κB的结合位点和糖皮质激素反应元件(GRE),Dex对CD18表达的抑制作用可能是间接的.
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PMA促进CD18表达的信号转导通路及机制
细胞激活剂肉豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)是蛋白激酶C(PKC)的特异性激动剂,PMA具有促进U937细胞和HL-60细胞分化的作用,能使U937细胞和HL-60细胞膜上的整合素β2亚族CD18蛋白增多.但PMA诱导作用的机制尚未明了.目的:进一步阐明PMA促进CD18表达的信号传导通路及机制.方法:定量RT-PCR法、Northern杂交法、流式细胞术研究了细胞激活剂PMA对人组织淋巴瘤细胞系U937细胞和人早幼粒白血病细胞系HL-60 CD18表达的作用及有关的信号传导通路.结果:U937细胞经不同浓度的PMA(5 ng/mL～200 ng/mL)处理8 h后,CD18 mRNA表达水平均有明显提高,且具有明显的剂效关系.50 ng/mL PMA可使CD18 mRNA表达水平达高,约为对照的3倍.50 ng/mL PMA对CD18 mRNA表达水平的诱导作用具有明显的时相性,随着作用时间延长,PMA诱导作用逐渐加强,作用24 h后,mRNA表达水平可达对照组的12.14倍.PMA还能引起U937细胞、HL-60细胞CD18膜蛋白的数量的增多.在HL-60细胞,伴随CD18膜蛋白数量的增多,细胞的粘附表型也由悬浮、分散变成贴壁、聚集状.PMA的诱导作用能被PKC或转录因子NF-κB的抑制剂十四烷基化多肽抑制剂Myr (Myr. Arg-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln-Lys-Asn-Val)和pyrrolidinedithiocarbamate(APDC)所抑制,但不能被AP-1的抑制剂curcumin所阻断.本实验还发现PMA能诱导U937细胞的IL-8的mRNA表达,这种作用能被NF-κB的抑制剂所抑制.结论:PMA促进CD18表达的作用是通过激活该细胞的PKC,进而激活转录因子NF-κB实现的.由于CD18基因中缺乏NF-κB的结合元件,提示NF-κB的作用可能是间接的.尽管PMA可激活AP-1,CD18基因启动子上也有AP-1的结合位点,但AP-1不是促进CD18表达所必需的转录因子.IL-8有可能参与了PMA对CD18表达的诱导作用.
