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一氧化氮参与铁负荷肾小管细胞毒作用的机制及其防治
目的探讨一氧化氮(NO)参与铁负荷肾小管细胞毒作用的可能机制,评价氧自由基清除剂在铁肾小管细胞毒中的防治作用及其与NO的关系.方法在建立原代鼠肾近端小管上皮细胞培养体系的基础上,以孵育液中NO2-产量(Griess反应)和小管细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率改变为线索,比较不同剂量铁剂、各氧自由基清除剂、L精氨酸(L-Arg)和CO合成酶抑制剂,左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)分别作用12h后在非脂多糖(LIS)组和LPS组(10μg/ml)中对小管细胞毒作用及与NO代谢的影响;同时用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同剂量铁剂与LPS的联用下诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达改变.结果NTA-Fe可以剂量依赖的方式同步增加LDH释放(P＜0.001)及孵育液中NO2-的产量(P＜0.001);但在LPS组中细胞毒作用的增加(P＜0.001)并不伴随N02-的明显改变(P＞0.05).LPS诱导的iNOS转录上调可为NTA-Fe增强,但仅限于500μmol/L(P＜0.01).在LPS组中,加入L-精氨酸及不同剂量L-NAME可分别加重和缓解铁的细胞毒作用;然而,L-NAME的防护作用在铁剂组中并不明显;OH清除剂可防护铁的毒作用(P＜0.001),但NO2-水平的相应下降仅见于二甲基硫脲(DMTU)作用的LPS组中(P＜0.05).结论在肾小管上皮细胞中,NO可促进NTA-Fe的细胞毒作用;一定浓度范围内铁可增强LPS诱导的iNOS转录上调;OH是NTA-Fe细胞毒作用的主要介质;NO的参与很可能是通过与O2-和H2O2的相互作用及促进Fenton反应,生成高反应活性的OH及或ONOO-.
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慢性染镉小鼠肾近端小管上皮细胞的形态学观察
本实验取低剂量( 2mg/kg/ 次,2次/周)染镉3月小鼠肾脏作石蜡包埋,连续切片,经HE染色,细胞凋亡染色(Tunel法),着重观察肾近端小管细胞的形态结构变化,并对阳性凋亡细胞进行计数及图象分析;部分小鼠肾皮质作超薄切片,H-600型透射电镜观察近端小管细胞的超微结构.结果表明:染镉后,小鼠肾近端小管细胞主要有以下两种变化.1.近端小管上皮细胞变性、坏死.变性的细胞肿胀,刷状缘受损,胞质疏松,染色浅淡,严重时细胞核染色质凝缩,核异型、固缩、溶解、坏死.坏死小管周围淋巴细胞浸润明显,部分小管腔内可见嗜酸性凝固坏死物填充.透射电镜观察,变性细胞微绒毛受损,胞质内线粒体肿胀、溶解,细胞核变形,染色质浓集,核膜断裂.2.近端小管上皮细胞凋亡.凋亡细胞呈单个或局灶性分布,主要有以下形态特点:(1)细胞胞体变小,胞质浓缩,嗜酸性反应增强.(2) 细胞核核仁消失,染色质浓缩边集于核膜下,晚期核固缩、变小为均一的致密物,核碎裂. (3)形成凋亡小体.透射电镜观察,凋亡细胞胞体完整,微绒毛密集,核周胞质内线粒体丰富,无肿胀、变性,细胞核染色质边集,核固缩变小,可见凋亡小体形成.与对照组比较近端小管上皮细胞凋亡数量明显增多,P＜0.05,有显著性差异.上述结果提示,慢性染镉除引起肾近端小管上皮细胞坏死外,还有促进近端小管上皮细胞凋亡的作用.
