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庆大霉素致大鼠肾近端小管上皮细胞凋亡的超微结构研究
目的 探讨庆大霉素对实验性大鼠肾近端小管上皮细胞凋亡的影响.方法 通过给大鼠腹腔注射庆大霉素100mg/Kg/d,分别在连续用药第5天、8天、10天等不同天数处死大鼠,取肾脏制备超薄切片,在透射电镜下观察肾近端小管上皮细胞凋亡的情况.结果 大鼠连续注射庆大霉素5天、8天、10天后肾近端小管上皮细胞均有凋亡的发生,注射庆大霉素10天的大鼠肾小管上皮细胞出现较多坏死.结论 庆大霉素肾毒性作用部分是通过肾近端小管上皮细胞凋亡而实现的,细胞凋亡的发生与庆大霉素肾毒性作用强弱有关.
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尿本周蛋白促进肾小管上皮细胞凋亡的体外研究
多发性骨髓瘤(MM)患者尿本周蛋白(BJP)对肾近端小管上皮细胞(PTC)具有直接毒性,本研究通过体外观察BJP对PTC的凋亡作用以探讨BJP对PTC的部分毒性机制.将自MM患者尿中提取并经免疫固定法琼脂糖凝胶电泳进行鉴定的4例κ和λ型BJP以不同浓度与大鼠NRK52E株PTC共同培养12～48 h,用原位末端标记法、流式细胞仪及透射电镜检测凋亡.结果显示:①BJPκ组与BJPλ组BJP为10 mg/ml与20 mg/ml时诱导PTC凋亡的比例明显高于对照组及5 mg/ml,两组诱导PTC凋亡的比例随着培养时间的延长而显著增加且明显高于空白对照组;②BJPκ组与BJPλ组之间诱导PTC凋亡的比例无明显差异.结果表明,κ与λ型BJP均可诱导PTC凋亡,且随着BJP浓度及培养时间增加而增强.
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miR-30e*在顺铂诱导的肾近端小管上皮细胞凋亡和线粒体损伤中的作用
目的:观察顺铂诱导肾近端小管细胞损伤过程中miR-30e*的表达变化,并探讨其在顺铂诱导的小管细胞凋亡和线粒体损伤中的作用.方法:实时定量PCR(qRT-PCR)检测顺铂处理后的小管细胞miR-30e*的表达水平;使用重组慢病毒载体感染细胞,稳定高表达或低表达miR-30e*;使用流式细胞仪检测细胞凋亡,观察miR-30e*在顺铂诱导的小管细胞凋亡中的作用;qRT-PCR检测线粒体DNA(mtDNA)拷贝数,JC-1检测线粒体膜电位变化,探究miR-30e*在顺铂引起的线粒体损伤中的作用.结果:①顺铂处理肾小管上皮细胞后,miR-30e*的表达呈时间依赖性和剂量依赖性下调;②使用qRT-PCR检测重组慢病毒载体制备的稳定高表达或低表达miR-30e*的小管细胞株中miR-30e*的表达,过表达组增高了7倍,敲低表达组降低了近50％;③加入顺铂后,与对照组相比小管细胞凋亡增加,过表达miR-30e*对凋亡起保护作用,敲低miR-30e*则加重凋亡;④通过检测mtDNA的拷贝数发现顺铂诱导的线粒体损伤在48 h时有意义,迟于miR-30e*表达的下调,线粒体膜电位检测JC-1提示过表达miR-30e*对线粒体有保护作用.结论:顺铂处理小管细胞可降低其miR-30e*的表达;体外过表达miR-30e*对顺铂引起的小管细胞的凋亡和线粒体损伤具有保护作用,敲低miR-30e*会加重顺铂诱导的肾近端小管细胞凋亡和线粒体损伤.
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PEA3在白蛋白诱导肾小管上皮细胞损伤中的作用
目的:探讨PEA3在白蛋白诱导的肾近端小管上皮细胞损伤中的作用及机制.方法:体外培养小鼠近端肾小管上皮细胞,实验组分为对照组、空载对照组、PEA3过表达组、白蛋白造模组和PEA3处理组.实时荧光定量PCR检测PEA3转染效率.应用Annexin V-FITC/PI双染和Hoechst染色检测细胞凋亡.Western blot法和RT-PCR检测肾小管上皮细胞标志物E-cadherin、α-SMA及Vimentin的蛋白和mRNA变化水平.结果:①PEA3质粒转染后,过表达组的PEA3表达水平增高了2.5倍;②加入白蛋白刺激后,与对照组相比小管细胞凋亡增加,过表达PEA3显著抑制白蛋白诱导的小管细胞凋亡;③白蛋白刺激降低E-cadherin的表达,而增加了α-SMA和Vimentin的表达,PEA3过表达阻断白蛋白对E-cadherin的抑制作用,并降低α-SMA和Vimentin的表达.结论:PEA3可抑制白蛋白诱导的小管上皮细胞凋亡和上皮-间充质转分化.
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DJ-1/Nrf2通路对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用
目的 观察高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E应激损伤及DJ-1/Nrf2表达的变化,探讨其内源性抗氧化损伤机制.方法 大鼠肾小管上皮细胞分别用5.5 mmol/L葡萄糖(低糖组)和30 mmol/L葡萄糖(高糖组)刺激0、24、48、72、96 h.细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测不同时间点下肾小管上皮细胞的损伤程度,丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)检测细胞的氧化应激水平,Western blot检测DJ-1、Nrf2和血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达.过表达DJ-1,分为空质粒组和D J-1过表达组,高糖刺激下观察肾小管上皮细胞凋亡及Nrf2、HO-1蛋白表达水平.结果 随着高糖的刺激,48、72、96 h时间点的高糖组细胞应激损伤(0.89±0.02、0.82±0.02、0.80 ±0.03)呈时间依赖性加重,MDA含量[(0.17±0.01)、(0.18±0.03)、(0.23±0.01) nmol/mg蛋白]递进性升高而SOD活性[(29.43±3.35)、(23.95±2.69)、(20.68±1.86) U/mg蛋白]呈时间依赖性下降(P＜0.05);与0h时间点比较,高糖组48、72 h时间点的DJ-1蛋白表达水平(1.63 ±0.19、1.80±0.16)显著升高,72 h时间点的Nrf2和HO-1蛋白表达水平(1.60±0.13、1.83 ±0.27)亦明显升高(P＜0.05);然而,与72 h时间点比较,96 h时间点的DJ-1、Nrf2和HO-1蛋白表达水平(1.29 ±0.10、1.13 ±0.12、1.22±0.11)显著下降(P＜0.05).过表达DJ-1可轻度减少高糖引起的细胞损伤(空质粒高糖组:12.19±0.96;DJ-1过表达组:7.31 ±0.29),并显著增加Nrf2和HO-1蛋白的表达水平(2.20 ±0.34、1.87 ±0.31,P＜0.05).结论 DJ-1/Nrf2通路可能参与大鼠肾小管上皮细胞高糖氧化应激中的内源性细胞保护机制.
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切应力对肾近端小管上皮细胞的生物学影响
液体流动诱导的切应力所引起的细胞生物学改变是目前许多细胞研究领域的热点.既往研究主要集中于血流诱导的切应力在调节内皮细胞功能中的作用.近研究发现,在肾脏的近端小管上皮细胞,由尿液流动诱导的切应力对其具有多效性,如调节溶质的转运、影响细胞骨架的重组、改变细胞外基质的重塑及调节选择性基因和蛋白质的表达等.管流诱导的肾近端小管上皮细胞生物学改变的机制仍不清楚,可能与细胞骨架肌动蛋白的重排有关.
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大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病中肾小球“小管化”现象的观察
目的 观察大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病(puromycin aminonucleoside nephrosis,PAN)模型中肾小球“小管化”的现象.方法 将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组,溶媒对照组(一次性腹腔注射生理盐水2 mL)及注射嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PA)后2、5、10、15、20 d组(均一次性腹腔注射溶于生理盐水的嘌呤霉素氨基核苷15 mg/100 g),每组5只.采用一次性腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷15 mg/100 g的方法制作PAN模型.用HE染色、免疫荧光检测和透射电镜观察的方法确定各组大鼠肾小囊壁层上皮细胞的类型,测定各组24 h尿蛋白定量.采用SPSS 13.0统计软件分析各组该现象的发生率和严重度差异.结果 大鼠PAN模型肾小囊壁层的立方状上皮细胞的形态学特征和免疫学表型均与近端小管上皮细胞表型一致,即肾小球发生了“小管化”.模型初期,肾小球“小管化”的发生率和严重度随模型进展逐渐加重,10、15 d组较正常组均明显升高(P＜0.05),20 d组虽然“小管化”仍较正常组明显升高(P＜0.05),但已出现下降的趋势.肾小球“小管化”的发生率(r =0.55,P＜0.05)和严重度(r=0.56,P＜0.05)与24h尿蛋白定量正相关.结论 大鼠PAN模型发生了肾小球“小管化”,并且在模型中呈现动态变化.这一现象有可能为研究足细胞和肾小囊壁层上皮细胞损伤的机制提供新思路.
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慢性染镉小鼠肾近端小管上皮细胞的形态学观察
本实验取低剂量( 2mg/kg/ 次,2次/周)染镉3月小鼠肾脏作石蜡包埋,连续切片,经HE染色,细胞凋亡染色(Tunel法),着重观察肾近端小管细胞的形态结构变化,并对阳性凋亡细胞进行计数及图象分析;部分小鼠肾皮质作超薄切片,H-600型透射电镜观察近端小管细胞的超微结构.结果表明:染镉后,小鼠肾近端小管细胞主要有以下两种变化.1.近端小管上皮细胞变性、坏死.变性的细胞肿胀,刷状缘受损,胞质疏松,染色浅淡,严重时细胞核染色质凝缩,核异型、固缩、溶解、坏死.坏死小管周围淋巴细胞浸润明显,部分小管腔内可见嗜酸性凝固坏死物填充.透射电镜观察,变性细胞微绒毛受损,胞质内线粒体肿胀、溶解,细胞核变形,染色质浓集,核膜断裂.2.近端小管上皮细胞凋亡.凋亡细胞呈单个或局灶性分布,主要有以下形态特点:(1)细胞胞体变小,胞质浓缩,嗜酸性反应增强.(2) 细胞核核仁消失,染色质浓缩边集于核膜下,晚期核固缩、变小为均一的致密物,核碎裂. (3)形成凋亡小体.透射电镜观察,凋亡细胞胞体完整,微绒毛密集,核周胞质内线粒体丰富,无肿胀、变性,细胞核染色质边集,核固缩变小,可见凋亡小体形成.与对照组比较近端小管上皮细胞凋亡数量明显增多,P＜0.05,有显著性差异.上述结果提示,慢性染镉除引起肾近端小管上皮细胞坏死外,还有促进近端小管上皮细胞凋亡的作用.
